在个别患者中克服维奈托克/威托克耐药性的药物

　　为了验证基于图像的检测用于筛选，从1名患者的1份血液样本中获得的2s刺激细胞的技术复制使用一组含和不含维奈托克的对照药物(10nM)进行处理。技术复制样本中药物反应的比较显示，每一种单次分析都具有线性相关性(AnnexinV，R2=0.72；TMRE，R2=0.81；和浓缩核，R2=0.86)，确认了该系统的精度和重现性。　

　

　　考虑到细胞死亡是一个复杂的过程，与广泛的可测量的细胞内变化有关，结合来自每个细胞的各种测量可以提高细胞死亡检测的准确性。因此，我们使用多参数分析将从显微照片中获得的信息整合到一个细胞死亡指数中，该指数表示与STS+维奈托克训练对照中死亡细胞(阳性)相似的死亡细胞百分比(百分比阳性)。与单次分析的阈值分析相比，多参数分析增加了重复样本之间的线性相关性(R2=0.97)，因此被用于后续的高通量实验。　　

　　9例患者的CLL细胞的剂量反应研究证实了PC微环境条件下对维奈托克的耐药性。与维奈托克在10nM及以上时对未受刺激细胞的高效诱导25%-100%细胞死亡相比，所有患者的2S细胞在10nM时均受到保护。更高浓度的100和1000nm足以杀死9个患者中的3个的60%到80%的细胞。因此，我们选择10nM作为维奈托克的最佳筛选剂量，以鉴定通过阻断细胞存活信号而增强因维奈托克引起的细胞死亡的KIs。　　

　　为了证实这些结果，我们使用IL4作为模拟白血病微环境的替代方法。用2d刺激细胞的维奈托克剂量反应与il4刺激细胞的剂量反应进行对比，得到了每种单次试验的正相关(AnnexinV，R2=0.80；TMRE，R2=0.72；Draq5，R2=0.80)。与2S刺激相似，并与之前的体内研究一致，IL4刺激CLL细胞可诱导对10nm维奈托克的完全抗性。此外，细胞对维奈托克的反应(10nM)在1%患者血浆或5%胎牛血清存在时没有显著差异。　　

　　我们推测，对威尼托克拉斯的抗性可以被阻断微环境生存信号的KIs抵消。因此，在对10nM维奈托克不同但低敏感性(<60%阳性)的13例患者的2s刺激细胞中，结合10nM维奈托克筛选了320个KIs确定对个别患者而言维奈托克和KIs的最有效组合。通过确定归类为阳性(即死亡)细胞的百分比来评估维奈托克和allKIs的疗效。为了检测可能协同作用的药物对，并防止单药毒性高的KIs在分析中占主导地位，我们确定了添加10nM维奈托克会在多大程度上增加同一KIs的死亡细胞数。死亡细胞的增加超过单独使用KI被称为“维奈托克-enhancedeffect”。“基于药物联合诱导的总杀伤值，识别击中组合的截止值为25%，对应于筛查阳性的平均总杀伤63%。”　　

　　在该筛选中，患者样本的反应是高度可变的，一些表现出对广泛的KIs(P7，P11)的敏感性，而另一些对大多数药物的反应较差(P13，P15；然而，对于大多数患者(13例中的12例)，有一些KIs患者，venetoclx增强效应导致>细胞杀伤率增加45%，对应的平均总杀伤率为78%。　　

　　KIs被细分为31种获得美国食品和药物管理局(FDA)许可的药物和另外31种正在进行临床试验的化合物(1-3期)。重要的是，尽管每位患者在临床中至少有1例使用KI联合维奈托克时都是敏感的，但很少有KIs被认为是适合多个患者的。　　

　　最常产生高venetoclx增强效果的碘化钾是舒尼替尼(Sutent)，一种许可的多靶点酪氨酸碘化钾(平均增强效果为8/13患者的45%)。相比之下，在DMSO以上的大多数患者中，单独使用维奈托克的增强效果<25%。  　

    舒尼替尼在受2s刺激的细胞中仅具有中等的单药活性，平均杀伤率为30%(与KI文库中单药杀伤率31%的平均值大致相同)，在320个KIs中排名132位，这与单用CLL缺乏疗效一致。　　

　　维奈托克(威托克)杀伤的增强与临床预后标志物，包括通过测序评估的免疫球蛋白重链变量(IGHV)区域基因的突变程度之间没有相关性或最近描述的与IGHV状态和ZAP70甲基化相关的DNA甲基化亚群。维奈托克（威托克）在老挝可以买到吗？详情请扫码咨询：