维奈托克/威托克抗性MM的SRC明显高于维奈托克敏感MM

　　表达t(11；14)易位的MM细胞为研究负责BCL-2依赖的内在机制提供了一个独特的机会，并确定可以利用生物学来增加更广泛耐药MM群体的维奈托克敏感性。我们特别感兴趣的是，是否代谢和细胞能量在增加的BCL-2依赖性和t(11；14)MM对维奈托克的敏感性中起作用。　　

　　骨髓瘤的原发性易位发生在疾病发展的早期，t(11；14)易位使cyclinD1基因与免疫球蛋白重链(IgH)基因增强子并置，导致cyclinD1表达异常。Cyclind1依赖性CDK4/6的激活促进G1-S期细胞周期的转变。CyclinD1通过调控35个以上的转录因子来阻断细胞分化、增殖、线粒体生物发生和线粒体氧化磷酸化40，也显示出许多与cdk无关的功能。虽然我们的CoMMpass数据分析没有匹配的维奈托克敏感性数据，因此无法识别出对维奈托克敏感的基因，但在t(11；14)和非t(11；14)中观察到ETC基因表达减少，提示ETC活性可能是维奈托克敏感性的一个生物标志物。　　

　　我们使用t(11；14)作为替代，约40%的t(11；14)患者对venetoclas敏感，而<6%的非t(11；14)患者对venetoclas敏感。我们对细胞系的功能研究证实了这一点，证明ETC活性的降低对维奈托克的敏感性至关重要。我们的研究表明，低SQR活性是所有MM细胞中维奈托克敏感性的可靠读数，而与t(11；14)状态无关。重要的是，SQR活性可以通过快速和直接的活性测定方法在完整的透性全细胞中进行评估。直接评估复合物I的泛醌还原酶活性在技术上具有挑战性，因为它需要在保持复合物I35的结构和活性的同时分离线粒体并进行通透性化。另一方面，在补充外源琥珀酸盐的半通透性全细胞中，可以测定SQR的活性。　

　　我们也试图了解OXPHOS的升高是否促进了对维奈托克的抗性。我们之前已经证明，谷氨酰胺剥夺(抑制OXPHOS)会使耐药MM细胞系和患者样本对维奈托克23敏感。重要的是，这种对维奈托克的敏化在向谷氨酰胺缺失的细胞补充细胞原-酮戊二酸后被逆转，这表明OXPHOS的恢复促进了对维奈托克23的抗性。有趣的是，最近关于维奈托克复发CLL的研究也证实了细胞代谢的变化和OXPHOS的升高促进了维奈托克的抗性42，这支持了我们的观察，即OXPHOS升高与BCL-2依赖性降低相关。　　

　　B细胞对特定的促生存BCL-2成员的依赖是活化、发育和分化阶段特异性的。正常小鼠B细胞的激活/分化与ABT-737(一种Bcl-2、Bcl-xL和Bcl-w拮抗剂)敏感性的增加有关，这是由于在向浆细胞分化时Bcl-2的下降和Bcl-xL表达的增加。此外，先前对小鼠免疫系统影响的研究显示，ABT-737能抑制新生骨髓浆细胞和记忆B细胞的建立，而对原有的浆细胞或生发中心B细胞没有影响。这些结果表明，在B细胞中，BCL-2依赖是通过激活和/或分化阶段特异性方式调控的。在代谢方面，b细胞的激活和向浆细胞分化与TCA和oxphos4546的依赖性增加有关。t(11；14)MM是分化的产生抗体的浆细胞。然而，早期对CCND1/ccnd2扩增的MM细胞CD2亚群中CD138+MM表达谱的研究发现，b细胞系标记物MS4A1/CD20、VPREB和PAX547表达升高。　　

　　因此，本应表现出OXPHOS升高的多发性骨髓瘤浆细胞恶性肿瘤在表达/维持b细胞样特征时，可能被锁定为代谢受损抑制等状态。因此，ETC活性的抑制也与对维奈托克的敏感性相关，允许使用维奈托克进行有效的合成杀伤策略。有趣的是，显示低SQR活性和维奈托克敏感性的非t(11；14)OCI-MY5系也可能更像b细胞或基于其高表达的CD20未分化(VAGupta和LHBoise，未发表的观察)。在我们评估的有限数量的DLBCL细胞系中，SQR活性较低，我们无法检测到低SQR活性与维奈托克敏感性之间的相关性，这再次支持了差异。　

　　我们的研究还使我们能够阐明ETC作为维奈托克致敏的靶点。我们最初的研究集中在复合体II上。SDH的独特之处在于，它是唯一的ETC复合物，所有四个亚基都是单独核编码的，并且单独定位在TCA和ETC中发挥作用。四种SDH亚基在SDHA的突变(尽管罕见)中有不同的作用，这些突变与氧化磷酸化受损和严重代谢紊乱有关，而在复合物I缺失时，SDHB、C和D的突变与肿瘤发生有关。通过引入SDHCR72C突变体31或TTFA处理(在不影响SDH活性或复合物I活性的情况下干扰酶的SQR活性)，可以使MM细胞对维奈托克敏感，这表明靶向SQR可以诱导对BCL-2的依赖。先前的工作已经表明，死亡抵抗细胞增加了SRC50，复合物II在维持SRC和对死亡的抵抗中发挥作用。　　

　　我们发现，维奈托克抗性MM的SRC明显高于维奈托克敏感MM，TTFA或R72SDHC突变体抑制SQR降低了维奈托克抗性MM的SRC，并使其对维奈托克敏感。因此，我们的观察结果保证了选择性有效的SQR抑制剂的开发，以增加对BCL-2和维奈托克敏感性的依赖。急性髓性白血病的研究表明，氮杂胞苷靶向复合物II可诱导维奈托克敏感性。先前的研究已经证明了oncometabolite(R)2-hg表达IDH1/2mutant-expressingAML诱发bcl-2依赖通过抑制细胞色素c氧化酶(复杂IV)虽然我们随后显示，针对其他等复合物也可以使敏感维奈托克复杂二世的独特方面而不是导致质子传输的管道电子从琥珀酸不稳定泛醌，哪些抑制可以产生信号，提高BCL-2依赖性，值得进一步探索。　

　　复合物II与ROS的产生、琥珀酸的积累和HIF1-leptin-54的诱导有关，HIF1-leptin-leptin可诱导ATF455。ATF4被翻译后诱导，作为对缺氧、缺氧、蛋白酶体抑制或营养剥夺的综合应激反应的一部分，上调维持氨基酸代谢和抗氧化反应的基因。ATF4既通过激活自噬细胞33具有促生存作用，又通过诱导C/EBP同源蛋白(CHOP)诱导BIM、NOXA和PUMA具有促凋亡作用。NOXA之前已被证实参与诱导BCL-2依赖和对维奈托克36的敏感性，涉及MM60的硼替佐米细胞毒性和DLBCL61的panobinostat敏感性。ATF4在特定的细胞环境下可以诱导NOXA，而NOXA与mcl1结合时可以增加BIM与BCL-2结合的数量，这可能解释了ttfa诱导的BCL-2依赖。　　

　　我们必须注意到U266细胞不表达基础NOXA34，TTFA未诱导U266细胞NOXA，这可能导致U266细胞对BCL-2拮抗剂的敏感性降低。然而，有趣的是，虽然TTFA和IACS-010759在KMS21BM中均诱导ATF4和NOXA，但100°MTTFA并没有使这些细胞对维奈托克敏感。这可以通过复合物I和复合物II抑制时ATF4和NOXA蛋白诱导水平的差异来解释。与此同时，IACS-010759治疗后较高的ATF4和NOXA诱导水平足以使KMS21BM对维奈托克敏感。另一方面，TTFA处理KMS21BM时低水平NOXA诱导并不足以增加BIM对BCL-2的结合，并使细胞对维奈托克处理敏感。　　

　　乐泰组的研究明确表明，包括MM和其他接受过化疗的难治性癌症，其“启动效应”降低，即BH3激活剂与抗凋亡药物结合的数量不足，增加了诱导凋亡所需的阈值。因此，增加细胞“启动”状态的方法不仅会增加对现有化疗的敏感性，也会增强对BH3模拟物的敏感性。另一方面，在凋亡阈值之外的正常细胞，ETC抑制和维奈托克共处理均未致敏，我们观察到非mm细胞对维奈托克IACS-010759/TTFA+维奈托克处理不敏感，这进一步支持了上述结果。目前正在测试几种策略(地塞米松有无蛋白酶体抑制剂(NCT02755597)治疗MM，AML1352，68中的低甲基化剂)以增加BCL-2依赖和对维奈托克的敏感性。微小残留病(MRD)的存在与难治性疾病的出现密切相关。　

　　在t(11；14)患者中实现更深层的反应以去除MRD和减少毒性仍然是一个未被满足的需求。因此，我们认为，即使在t(11；14)患者样本中，识别新的致敏靶点也很重要。与细胞系相比，分离的骨髓瘤患者样本在体外不增殖。增殖细胞(更以预后差的MM47为特征)可能由于细胞分裂的能量和生物合成需要而更加依赖OXPHOS，从而使其对靶向等活性更加敏感。考虑到MM的遗传异质性，以ETC为靶点有可能最大限度地利用强力BCL-2拮抗剂维奈托克（威托克）的临床应用，并提供一种更统一的方法来对付难治性MM。老挝维奈托克好买吗？详情请扫码咨询：