乐伐替尼/乐卫玛是一种靶向VEGFR/FGFR的血管生成抑制剂

　　乐伐替尼（乐卫玛）用抗VEGF的抗体或靶向VEGFR2的多种RTK抑制剂的抗血管生成治疗可改善患有各种晚期癌症的患者的生存率。然而，由于获得性抵抗，治疗的持续时间受到限制，而患者的亚组由于内在抵抗而没有反应。这些血管生成抑制剂的替代生物标志物可能有助于改善对合适患者的选择，并有助于决定是否继续抗血管生成治疗。

　　识别抗血管生成治疗反应性患者的生物标志物包括血浆蛋白，循环内皮细胞和新型成像技术，但尚未建立可靠的预测性生物标志物。已经研究了内皮细胞和血管壁细胞（例如周细胞）之间的相互作用，并且鉴于发现贝伐单抗在一次性治疗大肠癌后增加了被周细胞覆盖的血管数量。肿瘤内皮细胞与周细胞相互作用的程度与对抗血管生成治疗的反应性有关。然而，尚未证明这些相互作用预示了抗血管生成治疗的抗肿瘤活性。因此，在临床前和临床癌症的抗血管生成治疗的预测生物标志物的开发中，这些相互作用的检查将是重要的。

　　我们先前曾报道过一种新型的多靶点VEGFR2 TKI乐伐替尼，可抑制KIT依赖性血管生成和与VEGFR3相关的淋巴管生成。 乐伐替尼在一项I期研究和II/III期临床研究中显示，针对患有DTC，MTC，HCC，黑素瘤和子宫内膜癌的患者，乐伐替尼具有针对多种类型癌症的活性。在这项研究中，我们调查了乐伐替尼的药理作用，并确定了在VEGF和FGF驱动的血管生成分析中的抗血管生成活性。接下来，在各种人类肿瘤异种移植模型的组中研究了乐伐替尼的抗肿瘤活性，以鉴定用于预测对乐伐替尼的反应的生物标志物。通过免疫组织化学（IHC）分析确定MVD和周细胞覆盖率，以进行血管评分分析作为候选生物标记，并分析血管评分与乐伐替尼的抗肿瘤活性之间的关系。另外，通过qPCR与血管生成相关的基因的mRNA表达水平与乐伐替尼的抗肿瘤活性相关。最后，如果血管评分能够识别人类癌症的肿瘤血管表型，则还使用人类肿瘤组织标本进行血管评分分析。

　　乐伐替尼的化学名称为苯氧基，并通过核磁共振和质谱法确定其化学同一性。肿瘤细胞系购自美国典型培养物保藏中心，但人胰腺肿瘤KP- 1和FEM细胞分别来自国家九州癌症中心和挪威镭医院研究基金会的Ostein Fodstad教授。通过稳定转染编码人VEGF121或小鼠FGF4（KP/FGF）进入KP-1细胞，然后通过G418（生命技术）进行选择。 VEGF121缺乏肝素结合位点，因此比VEGF165更易扩散。

　　FGF4具有信号肽，而FGF1和FGF2没有。因此，我们在本研究中选择了VEGF121和FGF4进行过表达，因为背侧气囊（DAS）分析中的体内血管生成是由包装在微孔腔中的肿瘤细胞分泌的血管生成因子驱动的。肿瘤细胞系维持在含有10％热灭活胎牛血清（FBS）的RPMI1640培养基中。通过先前描述的方法从人脐带中分离人脐静脉内皮细胞（HUVEC），并使用EGM-2 BulletKit进行培养。

　　将肿瘤细胞接种于细胞在96孔板上的0.1μml含10％FBS的RPMI 1640中进行培养。 24小时后，加入乐伐替尼或赋形剂，并在药物治疗后2或3天，通过测量3-2,5-二苯基四唑的吸光度来计算存活细胞的比率。每个孔中的溴化物（MTT），并相对于对照孔中的吸光度表示。 HUVEC增殖测定通过先前描述的方法进行。简而言之，将HUVECs接种在I型胶原包被的96孔板上，在0.6×103细胞中接种无血清培养基（SFM），其中含有2％FBS（2％FBS-SFM）和等分的len。乐伐替尼价格多少？更多详情可咨询下方微信。