Plk1的抑制提高了奥拉帕尼/利普卓的疗效

　　Plk1的抑制提高了奥拉帕尼（利普卓）的疗效　　

　　PARPi的使用是肿瘤学临床研究的一个活跃领域，因为它利用了HR缺陷肿瘤的合成致死率，并增强了化疗和放疗的细胞毒性作用(28)。然而，新的数据显示，一些HR缺陷的肿瘤对奥拉帕尼（利普卓）治疗表现出明显的耐药性。Plk1在PCa中过表达并参与了肿瘤的发生和发展，是切除后的PCa移植瘤模型中最显著的上调通路之一。Plk1抑制是否能增强奥拉帕尼（利普卓）的抗肿瘤活性目前尚不清楚。　　

　　我们研究了BI2536和奥拉帕尼（利普卓）是否协同抑制CRPC细胞的生长。首先，用BI2536、奥拉帕尼（利普卓）或BI2536联合奥拉帕尼（利普卓）处理22RV1细胞，收获用于分析凋亡标志物裂解-parp。可见，低剂量奥拉帕尼（利普卓）(0.1个单位M，lane4)对22RV1细胞的凋亡反应非常弱。与BI2536或奥拉帕尼（利普卓）单独治疗(第2和第4泳道)相比，BI2536和奥拉帕尼（利普卓）联合治疗可显著增加细胞凋亡反应。接下来，我们进行荧光激活细胞分类器(FACS)分析，以监测药物治疗后的细胞周期缺陷。结果表明，BI2536的存在增强了22RV1细胞奥拉帕尼（利普卓）相关的细胞死亡。　　

　　AnnexinV-FITC/碘化丙啶(PI)检测细胞凋亡，也显示BI2536和奥拉帕尼（利普卓）联合治疗显著增加了凋亡细胞。与此一致的是，BI2536和奥拉帕尼（利普卓）联合处理22RV1细胞时，比单独使用BI2536和奥拉帕尼（利普卓）具有更强的菌落形成抑制作用。然后，我们研究了在哺乳动物细胞中对DSBs的反应中形成的通常是在哺乳动物细胞中形成的。仅用BI2536或奥拉帕尼（利普卓）处理对其形成有边际影响。BI2536+奥拉帕尼（利普卓）处理22RV1细胞24小时后，明显影响了细胞中各灶的形成。每个细胞病灶数量增加，病灶增大，病灶荧光强度增强。　　

　　最后，BI2536联合奥拉帕尼（利普卓）与BI2536或奥拉帕尼（利普卓）单药治疗相比，在蛋白水平上也显著提高了表达水平。为了进一步研究BI2536与奥拉帕尼（利普卓）的协同作用，我们测定了联合指数(CI)。对IC50值的测量显示，奥拉帕尼（利普卓）处理22RV1细胞的IC50值为70wowM。而与50nMBI2536联合处理细胞时，奥拉帕尼（利普卓）的IC50值降低到20μM。两药合用指数为0.58，说明BI2536与奥拉帕尼（利普卓）有较强的协同作用。综上所述，Plk1抑制可使奥拉帕尼（利普卓）的抗肿瘤活性增敏，说明BI2536与奥拉帕尼（利普卓）有较强的协同作用。　　

　　BI2536和奥拉帕尼（利普卓）联合治疗可协同阻断CRPC细胞来源的异种移植瘤的生长　　

　　为了评估这种组合活性，我们接下来在22rv1衍生的异种移植小鼠模型中测试了联合治疗的效果。单独使用BI2536或奥拉帕尼（利普卓）与未治疗对照组相比，对肿瘤生长无明显影响。相比之下，BI2536联合奥拉帕尼（利普卓）比单独使用BI2536或奥拉帕尼（利普卓）具有更明显的肿瘤抑制作用。从组织学上看，对照组的肿瘤由肿瘤上皮细胞组成，具有明显的核多形性，1-2个突出的核核和少量纤维间质中大量的有丝分裂象。这些组织病理学特征与体内高级别前列腺腺癌相似，通常与较差的临床结果相关。然而，与BI2536或奥拉帕尼（利普卓）单方治疗的肿瘤或对照组相比，BI2536和奥拉帕尼（利普卓）联合治疗的肿瘤表现出细胞凝聚、核固缩的凋亡小体增多。疣状Ki67和裂解半胱天冬酶3也证实，肿瘤联合治疗有显著减少整体扩散和显著增加细胞凋亡，表明Olaparib和BI2536导致更有效的前列腺癌细胞杀死相比与Olaparib单一疗法。　　

　　总之，这些研究支持了Plk1抑制剂BI2536和奥拉帕尼（利普卓）在人类前列腺癌细胞中协同作用的观点，为治疗CRPC患者提供了一种新的有前景的治疗选择。这些结果也与我们在细胞研究中观察到的结果一致，为奥拉帕尼（利普卓）和BI2536在体内外具有很强的协同作用提供了额外的证据。