奥拉帕尼/奥拉帕利的治疗效果分析

　　奥拉帕尼（奥拉帕利）治疗效果怎么样？　　

　　1.奥拉帕尼（奥拉帕利）对卵巢癌细胞活力的抑制作用呈时间依赖性　　

　　我们首先评估了奥拉帕尼（奥拉帕利）对SKOV3、A2780和OVCAR-3卵巢癌细胞系细胞活力的影响。采用细胞计数kit-8(CCK-8)法测定奥拉帕尼（奥拉帕利）诱导生长抑制的最低有效剂量。奥拉帕尼（奥拉帕利）可以抑制卵巢癌株的生长，48小时后，SKOV3细胞的IC50值为21.09，A2780细胞为5.94，OVCAR-3细胞为12.23。为了进一步阐明其生长抑制作用，我们使用CCK-8法分析了奥拉帕尼（奥拉帕利）(5mol/l)存在时SKOV3、A2780和OVCAR-3的细胞活力。将细胞分为两组:对照组和奥拉帕尼（奥拉帕利）组。用酶标仪测定了450nm波长下的光密度。　　

　　2.低剂量奥拉帕尼（奥拉帕利）对卵巢癌细胞系的影响　　

　　采用流式细胞术分析奥拉帕尼（奥拉帕利）(2.5-20的时间单位)对SKOV3、A2780、OVCAR-3等卵巢癌细胞系凋亡的影响。将细胞分为5组:对照组和奥拉帕尼（奥拉帕利）组(20°M、10°M、5°M、2.5°M)。Annexin-V-FITC和PI双染色分析细胞凋亡情况。与之相比，20和10大剂量组的细胞凋亡率分别增加到12.51%和13.29%(p<0.01)。而低剂量(5血氧饱和度M和2.5血氧饱和度M)组细胞凋亡率分别为7.47%和6.78%，未显著增加细胞凋亡。然后我们把A2780和olaparibOVCAR-3细胞在相同条件下和量化的细胞凋亡率。有趣的是，低剂量的olaparib(5μM)治疗不会增加A2780细胞和凋亡细胞OVCAR-3细胞，细胞凋亡率为4.05%A2780OVCAR-3细胞细胞和10.46%。因此，我们推测低剂量奥拉帕尼（奥拉帕利）(5liuM)可能触发卵巢癌细胞的衰老而不是凋亡。　　

　　3.奥拉帕尼（奥拉帕利）诱导卵巢癌细胞衰老　　

　　基于奥拉帕尼（奥拉帕利）抑制细胞增殖的发现，我们假设卵巢癌细胞在奥拉帕尼（奥拉帕利）的反应中经历了衰老。SA-ir-gal染色检测细胞衰老，SA-ir-gal染色是最常见的细胞衰老标志物。此外，我们评估奥拉帕尼（奥拉帕利）是否以时间依赖的方式诱发卵巢癌细胞衰老。将SKOV3细胞分为4组:对照组、48h奥拉帕尼（奥拉帕利）治疗组、72h奥拉帕尼（奥拉帕利）治疗组和6d奥拉帕尼（奥拉帕利）治疗组。这些结果清楚地表明，长期(6天)奥拉帕尼（奥拉帕利）治疗比短期(48小时)治疗更明显地增加SA-gal阳性率，这些数据表明奥拉帕尼（奥拉帕利）诱导卵巢癌细胞衰老是时间依赖性的。　　

　　衰老的另一个标志是衰老相关异染色质聚集(SAHF)的形成，DAPI、Ki67和P16可以检测到这一现象。此外，奥拉帕尼（奥拉帕利）处理后，ki67阳性细胞数量较对照组显著减少，而相同处理条件下，p16阳性细胞数量显著增加。结果表明，低剂量奥拉帕尼（奥拉帕利）可诱导卵巢癌细胞衰老。　　

　　我们进一步论证了奥拉帕尼（奥拉帕利）对其他卵巢癌细胞的治疗作用。有统计学意义的是，SKOV3奥拉帕尼（奥拉帕利）处理组的SA-gal细胞在6天内分别从对照组的5.4%增加到50.8%(p<0.001)。在A2780细胞中，SA-gal阳性比例从对照组的4.6%增加到处理组的68.7%(p<0.001)。与对照组相比，OVCAR-3细胞中SA-gh-gal阳性比例从13.6%增加到77.1%(p<0.001)。　　

　　我们知道，衰老细胞会出现一种独特的衰老相关分泌表型(SASP)，因此我们检测了一些炎症细胞因子和趋化因子(如IL-1B、IL-6、IL-8、CXCL1、CXCL10)的表达，这些是SASP的主要标记。通过实时定量PCR(RT-qPCR)分析证实，A2780细胞中CXCL2、CXCL1、IL-6、IL-18、IL-1B、IL-13表达上调。OVCAR-3细胞中CXCL8、IL-13、TGFTGFinhibitor3、IL-6表达明显高于对照组。这些数据表明，低剂量奥拉帕尼（奥拉帕利）可诱导卵巢癌细胞衰老，并呈时间依赖性。　　

　　4.奥拉帕尼（奥拉帕利）抑制卵巢癌细胞进入细胞周期的G0/G1期　　

　　为了进一步阐明衰老相关的生长抑制，我们通过流式细胞仪分析了奥拉帕尼（奥拉帕利）存在下SKOV3、A2780和OVCAR-3的细胞周期图谱。细胞分为两组:对照组和奥拉帕尼（奥拉帕利）长期(6天)治疗组。相同处理条件下，SKOV3奥拉帕尼（奥拉帕利）处理组G0/G1期、S期和G2/M期细胞比例分别为82.21%、5.56%和11.42%，A2780组为76.11%、14.28%和9.35%，OVCAR-3组为71.25%、19.69%和8.52%。数据显示，与对照组相比，奥拉帕尼（奥拉帕利）治疗组所有卵巢癌细胞(SKOV3、A2780、OVCAR-3)G0/G1期均明显升高(p<0.05)。这些结果可以认为奥拉帕尼（奥拉帕利）抑制卵巢癌细胞处于细胞周期的G0/G1期。然后我们用westernblotting检测细胞周期蛋白的表达。同时，A2780细胞中P53和p-RB表达上调。在OVCAR-3细胞中，P53表达下调，p-RB表达上调。值得注意的是，这些卵巢癌细胞系中CDK4、CDK6、cyclinD1和cyclinD3的表达水平存在很大差异。这些数据提示奥拉帕尼（奥拉帕利）通过P16-RB/P53-RB途径诱导细胞衰老，但奥拉帕尼（奥拉帕利）对细胞周期的抑制模式也取决于不同的细胞类型。　　

　　5.奥拉帕尼（奥拉帕利）在体内抑制卵巢癌的进展期　　

　　我们利用肿瘤异种移植模型在体内分析奥拉帕尼（奥拉帕利）抑制卵巢癌进展期的作用。由于Ki67与肿瘤细胞的增殖密切相关，这一结果再次证明奥拉帕尼（奥拉帕利）可以抑制卵巢癌细胞的增殖。奥拉帕尼（奥拉帕利）怎么从老挝药厂买到呢？详情请扫码咨询: