奥拉帕尼/奥拉帕利对卵巢癌有抗肿瘤作用

　　聚(adp-核糖)聚合酶(PARP)是DNA损伤早期应激反应的重要分子，参与DNA损伤修复和细胞衰老。奥拉帕尼（奥拉帕利）作为PARP抑制剂，对高级别浆液性卵巢癌有抗肿瘤作用，但对细胞衰老的影响尚未见报道。本研究旨在探讨奥拉帕尼（奥拉帕利）在调控卵巢癌细胞衰老中的作用。　　

　　方法:　　

　　通过使用衰老相关的半乳糖苷酶(SA-gal)和衰老相关的异染色质聚集(SAHF)检测奥拉帕尼（奥拉帕利）对卵巢癌细胞衰老的影响。定量实时聚合酶链反应分析衰老相关分泌表型(SASP)。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。在裸鼠异种移植模型上分析了奥拉帕尼（奥拉帕利）对肿瘤生长的影响。　　

　　结果:　　

　　长期(6天)奥拉帕尼（奥拉帕利）(5多酚M)显著抑制卵巢癌细胞的生长，使细胞周期阻滞在G0/G1期，SA-ir-gal染色阳性细胞和SAHF阳性细胞明显增多。奥拉帕尼（奥拉帕利）处理后SKOV3细胞中P16和视网膜母细胞瘤蛋白(p-RB)表达显著增强，A2780细胞中P53和p-RB表达上调。OVCAR-3细胞中P53表达下调，p-RB表达上调。SKOV3异种移植小鼠腹腔给药奥拉帕尼（奥拉帕利）(10mg/kg/day)，可降低肿瘤体积(p<0.01)。　

　

　　结论:　　

　　卵巢癌患者持续低剂量奥拉帕尼（奥拉帕利）诱导P16或P53依赖的衰老。　　

　　奥拉帕尼（奥拉帕利）是一种口服PARP抑制剂，可增加PARP-DNA复合物的形成，从而阻断PARP介导的DNA损伤修复，破坏细胞稳态，加速细胞凋亡。肿瘤抑制基因BRCA1/2中与DNA修复相关的蛋白质的种系突变使女性易患卵巢癌。奥拉帕尼（奥拉帕利）通过攻击携带BRCA1和BRCA2突变的癌细胞的关键缺陷，特异地影响靶向细胞的DNA损伤修复机制。可用于BRCA基因突变、对铂类药物敏感的复发性严重卵巢癌患者的维持治疗。作为PARP的抑制剂，奥拉帕尼（奥拉帕利）对高级别浆液性卵巢癌具有抗肿瘤作用。关于奥拉帕尼（奥拉帕利）对肿瘤细胞凋亡影响的文章较多，但其对细胞衰老的影响尚未见报道。临床研究证实奥拉帕尼（奥拉帕利）作为单药在I期和II期临床试验中表现出良好的疗效。　　

　　然而，使用高剂量(400mg，2次/d)会导致6%的患者出现3-4级呕吐，3%出现3-4级疲劳，3%出现3-4级贫血。一些研究报告，低剂量(100毫克，每日两次)的奥拉帕尼（奥拉帕利）也有临床活性。在Mateo等人的研究[19]中，他们发现III期临床试验推荐的奥拉帕尼（奥拉帕利）片单药治疗剂量为每天两次300毫克，使给药次数从16粒胶囊简化为每天4片。因此，我们希望奥拉帕尼（奥拉帕利）的持续低剂量给药能够提供一种新的临床用药方案，缓解不良反应。在本研究中，我们发现低浓度奥拉帕尼（奥拉帕利）诱导卵巢癌细胞衰老而不是凋亡。因此，在后续的所有工作中，均以5个碱基M为最佳浓度。我们知道，SA-gal、SAHF和SASP是衰老最常见的标记物。在我们的实验中，我们检测了这些生物标志物，进一步证实了低剂量奥拉帕尼（奥拉帕利）可以引发衰老而不是凋亡。　　

　　衰老通常不会发生，虽然短暂的沉淀应力，因为细胞可以恢复循环的压力的解决。早衰癌细胞与强SASP相关，在免疫功能紊乱时，SASP的促炎性质可以招募免疫细胞，杀伤和清除衰老细胞或其他存活的癌细胞。在肿瘤细胞中，化疗诱导的衰老是细胞凋亡的重要替代。研究表明，不可逆衰老的发生需要一段较长时间(>4天)的刺激，促使细胞分裂或不分裂。Schmitt等人报道了P53在癌症中的不依赖凋亡的功能，表明过表达Bcl-2的小鼠淋巴瘤通过P53和P16INK4a控制的衰老程序而不是凋亡来对化疗做出反应。在我们的实验中发现，奥拉帕尼（奥拉帕利）(5liuM)的长期(6天)治疗明显抑制了卵巢癌细胞(SKOV3、A2780和OVCAR-3)的生长，导致细胞衰老呈时间依赖性。　　

　　细胞周期阻滞是细胞衰老的重要表现。流式细胞术显示奥拉帕尼（奥拉帕利）对卵巢癌细胞在G0/G1期的阻滞作用。我们知道，P16-RB和P53-RB是细胞衰老的重要信号转导通路。在P16-rb/P53-rb通路中，衰老刺激激活P16/P53，P16/P53进而通过激活p-RB[27]诱导衰老，不同的反应可能取决于来源的组织和物种。CyclinD3是细胞周期中重要的调节因子，与细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4和CDK6)结合构成驱动细胞增殖的核心细胞周期机制。视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma，RB)是一种细胞周期调节因子，主要调控G0期、G1期向S期的过渡。　　

　　CDKs系列(CDK2、CDK4、CDK6)在控制p-RBs的活性中起重要作用。当RB被这些CDKs磷酸化时，主要导致基因失活，进而导致细胞周期进程。我们的结果表明，奥拉帕尼（奥拉帕利）可以通过增加SKOV3细胞中P16、RB806、CDK2的表达和降低cyclinD3、CDK4的表达来诱导衰老。另一方面，奥拉帕尼（奥拉帕利）通过增加A2780细胞中P53、RB806、cyclinD3的表达和降低CDK4、CDK6的表达来诱导衰老。在OVCAR-3细胞中，奥拉帕尼（奥拉帕利）通过增加RB806的表达，降低P53和CDK4的表达，诱导细胞衰老。衰老细胞失去了丝裂原的反应能力和DNA合成能力，无法进入S期开始染色体的复制完成增殖。因此，在细胞周期中G1期被阻塞，导致G0/G1期比例增加。这些细胞周期调控蛋白表达的变化提示奥拉帕尼（奥拉帕利）可能通过P16-RB/P53-RB信号通路诱导细胞衰老，从而抑制卵巢癌细胞的增殖。　　

　　此外，我们还研究了奥拉帕尼（奥拉帕利）在体内诱导细胞衰老的作用。采用裸鼠异种移植模型，皮下注射引物。这种模型不会产生腹水，腹水是一种调节不同细胞成分(如间皮细胞)衰老和存活的环境成分，导致癌细胞存活。用奥拉帕尼（奥拉帕利）治疗2周后，对小鼠进行肿瘤检查，发现肿瘤体积减小。可能是细胞衰老分泌小体重编程提高了化疗疗效。最近的体内研究报道，卵巢癌细胞衰老的激活与强SASP相关。SASP可以吸引和激活免疫系统细胞，改变卵巢癌微环境，导致免疫监视，进而促进免疫细胞清除衰老细胞。SASP的某些成分(如IL-6、IL-8)有助于衰老反应的抑癌功能。因此，在本手稿中，SASPs显著增加了衰老细胞(奥拉帕尼（奥拉帕利）治疗组)。　　

　　综上所述，本实验旨在描述奥拉帕尼（奥拉帕利）在卵巢癌中诱导细胞衰老的机制，并强调细胞衰老的某些方面可以作为卵巢癌治疗的靶点。奥拉帕尼（奥拉帕利）在孟加拉碧康买多少钱一盒？详情请扫码咨询: