艾曲波帕对血小板修复的具体作用测试结果

　　为了评估艾曲波帕（艾曲博帕）是否能促进人HSPC中DNA DSB的修复并确定相关途径，将从健康个体获得的CD34 +细胞首先在存在或不存在艾曲波帕的情况下培养24小时，然后暴露于低剂量（2Gy）的IR中，然后转染NHEJ或HR DNA DSB修复报告质粒。艾曲波帕显着改善IR后的NHEJ活性。由于DNA DSB仅在细胞周期的S/G2晚期才被HR修复，因此我们检查了HR在主动分裂CD34 +细胞中的效率和表达c-MPL的HEL 92.1.7细胞。艾曲波帕在IR后未在这些细胞中促进HR活性。

　　为了区分快速运转的C-NHEJ和动力学较慢的alt-NHEJ修复机制，按上述方法培养和辐照CD34 +细胞，然后评估各种条件下IR诱导的DSB的指示物H2AX磷酸化（γH2AX）的变化。 IR后的次数。在两种培养条件下，IR 1小时后均观察到H2AX磷酸化的最大百分比，这表明艾曲波帕不能阻止HSPC中DNA DSB的形成。IR后五小时，大多数用艾曲波帕培养的细胞已解析出DNA DSB，而对照组中γH2AX+细胞的百分比仍高出2倍。观察到的效果是特罗波帕特所特有的。去除其他细胞因子并不能阻止DNA修复。到IR后24小时，对照组的DNA DSB解析度相似，这表明在没有艾曲波帕的情况下，DNA修复是通过作用较慢的途径发生的。当在培养物中添加TPO时，可获得相似的结果。

　　为了确认艾曲波帕通过促进具有快速动力学的途径来增强受辐照的人HSPC中DNA DSB的修复，我们抑制了DNA-PK，这是一种针对快速运作的C-NHEJ途径的激酶。在培养过程中添加DNA-PK抑制剂NU7441对1小时测量的DNA DSB形成或24小时的DNA修复没有影响，但完全消除了HSPC中艾曲波帕在5小时观察到的DNA DSB修复的增强动力学。为了进一步证实这些发现，我们使用多光谱成像流式细胞仪在单细胞分辨率下检查了核γH2AX灶。当在培养过程中加入NU7441时，在存在艾曲波帕的情况下，在IR后5小时，每个HSPC在HC5上检测到的γH2AX病灶的频率也显着增加。这些结果表明，在人类HSPC中5小时测得的艾曲波帕增强了基线快速运作的依赖DNA-PK的C-NHEJ DNA修复机制。相比之下，在不存在艾曲波帕的情况下，更多的细胞使用24小时测量的较慢的，独立于DNA-PK且容易出错的alt-NHEJ机制解析DNA DSB。

　　接下来，我们研究了促进C-NHEJ修复对基因组完整性，细胞存活率和辐射HSPC功能的影响。由用艾曲波帕培养的辐照HSPC制备的中期显示的染色体畸变比不存在艾曲波帕的辐照细胞显着少，并且相对于未暴露于IR的培养HSPC而言，畸变仅微乎其微。在培养过程中加入艾曲波帕也与凋亡的大幅减少有关并提高了生存率与对照组比较。当NU7441抑制C-NHEJ DNA修复时，用艾曲波帕观察到的细胞存活率被废除。

　　鉴定了涉及DNA损伤信号传导，细胞周期调节，细胞凋亡或DNA修复的128个基因，并通过RT-qPCR阵列比较了在有或没有艾曲波帕的辐射HSPC中它们的表达。IR后五小时，与未接种艾曲波帕的HSPCs相比，用艾曲波帕培养的细胞显示四个促凋亡和生长抑制基因GADD45G，BBC3，PPM1D和CCNO的表达显着降低（3到6倍）。为了评估这些发现的功能相关性，在CFU祖细胞测定中并通过移植到NSG小鼠中评估了细胞。在CFU分析中，用艾曲波帕培养的辐照HSPC产生的CFU比对照组多3到4倍。在异种移植测定中，与对照组相比，在存在艾曲波帕的条件下培养的IR暴露的HSPC移植后3个月，观察到人类细胞移植增加了两倍。现在艾曲波帕仿制药多少钱？更多详情可咨询下方为微信。