艾曲波帕/瑞弗兰促进人类造血干细胞和祖细胞的DNA修复

　　已经提出造血干/祖细胞（HSPC）功能障碍与应计DNA损伤之间的因果关系。需要临床相关策略来维持这些细胞中的基因组完整性。在这里，我们报告艾曲波帕，一种用于临床的血小板生成素（TPO）受体的小分子激动剂，可促进人HSPC中的DNA双链断裂（DSB）修复。我们证明艾曲波帕(瑞弗兰)专门激活经典的非同源末端连接（C-NHEJ）DNA修复机制，已知支持基因组完整性的途径。艾曲波帕介导的DNA修复可增强原代人HSPC的基因组稳定性，存活率和功能，如核型分析，集落形成单位测定以及免疫缺陷NSG小鼠移植后所证实的。

　　最近的研究已经发现血小板生成素（TPO）的特定功能，HSPC存活的主要调节剂，在促进C-NHEJ介导的DNA DSB修复在这些细胞中。在低剂量IR之前，鼠类HSPC短时间暴露于TPO可以保护细胞免受基因组不稳定的影响，并部分挽救了它们的功能丧失。这些数据暗示在用抗癌药治疗之前激活HSPC中的TPO信号轴可能通过降低HSPC损伤和继发性血液系统恶性肿瘤的风险而提供临床益处。重组TPO不可用于临床，但是最近显示TPO的合成小分子模拟物艾曲波帕可以刺激骨髓（BM）衰竭患者的多能长期再填充HSPCs，导致持续的三系造血功能。在这项研究中，我们调查了艾曲波帕是否还可以促进人类HSPC中的DNA修复。

　　G-CSF动员后，通过正常志愿者的采血收集人CD34 +细胞。γH2AX分析用于评估2Gy IR后1、5和24小时的DNA DSB修复情况，在存在早期作用的细胞因子（SCF和Flt3L，命名为SF）或补充了艾曲波帕的SF（ SFE），带有和不带有DNA-PK抑制剂（NU7441）。按照相同的程序处理和培养模拟照射的细胞，但不暴露于IR。DNA DSB修复活性及其潜在机制的结果列于，并显示了证明DSB修复对基因组完整性，细胞存活和功能的影响的数据。

　　在IR和报告质粒电穿孔之前，用SF或SFE培养24小时的人HSPC中NHEJ DNA修复的效率（n ＝ 3）。在IR和报告质粒电穿孔之前，培养96小时的人HSPC中HR DNA修复的效率以增强细胞循环（n=3）。HR DNA修复在主动循环表达c-MPL的HEL 92.1.7细胞中的效率，所述HEL 92.1.7细胞在IR和报告质粒电穿孔之前进行96小时的培养（n = 3）。用SF，SFE或SFE + NU7441（n = 24，来自13个独立供体）培养的人HSPC在2Gy IR后1、5和24小时的H2AX磷酸化（γH2AX）总结。插图显示了代表性的γH2AX免疫染色流式细胞仪图，表明与SF对照组相比，在培养过程中添加DNA-PK抑制剂NU7441完全消除了艾曲波帕在5小时时观察到的DNA DSB修复动力学的增强。

　　流式细胞仪门控策略所示。在SF，SFE，FE（Flt3L和艾曲波帕但无SCF）或SE（SCF和艾曲波帕但无Flt3L）中培养的人类HSPC的IR后5小时时γH2AX+细胞的汇总百分比（n = 3）。在存在或不存在NU7441的情况下，在使用SFE培养的人HSPC中使用多光谱成像流式细胞仪在IR后5小时检测到的每个细胞的核γH2AX焦点频率。显示了3个实验的代表。插图显示了代表细胞的明场（BF）图像，γH2AX病灶和DAPI核染色。现在艾曲波帕仿制药多少钱？更多详情可咨询下方为微信。