帕博西尼/哌柏西利增加细胞凋亡的机制

　　CNE-1和CNE-2细胞对帕博西尼和辐射反应的RB通路状态和细胞周期变化　　

　　为了分析帕博西尼在CNE-1和CNE-2细胞中干预RB通路的能力，我们采用Westernblot方法来评估通路关键成分的蛋白表达水平。CNE-1和CNE-2细胞系中均检测到pRB、RB、CDK4、CDK6等蛋白。　　

　　然而，与p16阳性的CNE-1相比，CNE-2中p16表达极低。这项研究还显示，帕博西尼浓度的方式减毒RB磷酸化CNE-1和CNE-2孵化后各种帕博西尼18小时的浓度和andB，但帕博西尼没有显著影响CNE-2总RB蛋白的表达以及RB-modifying酶到CDK6CNE-1和CNE-2。本研究还表明，帕博西尼对RB磷酸化的破坏在CNE-1(18小时暴露)和CNE-2(6小时暴露)中达到最大值，而在超过18小时后，RB磷酸化水平逐渐升高。　　

　　同时，为了更好地了解帕博西尼和RT的抗肿瘤作用，我们比较了不同方案的细胞周期分布效应。对于cne1细胞，与单纯RT组、单纯帕博西尼组和先放疗后放疗组相比，同步放疗和先放疗后放疗的G2/M细胞比例明显提高(21.45%和27.3%，分别比单纯RT组的16.2%、12.75%和11.15%)。　　

　　CNE-2细胞，并发辐射和辐射其次是帕博西尼类似地增强G2/M细胞比例显著下降的百分比抗放射性的G1期相对于帕博西尼-only和帕博西尼紧随其后RT组(G2/M:47.65%，50.5%，7.18%和7.62%，G1:16.55%和19.4与54.2%和50.85%)。与单药治疗相比，RT后同步方案和掌痛组增加了G2/M细胞比例，降低了G1细胞的抗辐射能力。因此，这两种联合治疗方案获得了较高比例的凋亡细胞，这归因于更突出的辐射敏感性。　　

　　CNE-1和CNE-2细胞在帕博西尼和辐射作用下的凋亡变化　　

　　接下来，我们研究了帕博西尼联合放疗对CNE-1和CNE-2细胞凋亡的影响。细胞在放疗前、同时、后分别用帕博西尼处理48小时，采用AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞术分析细胞凋亡情况。对于CNE-1，帕博西尼和放疗明显比对照组介导更多的细胞凋亡(5.97%和10.685%对5.335%)。在联合治疗中，同时接受帕博西尼治疗和放疗后接受帕博西尼治疗的细胞凋亡比例明显高于单纯rt治疗组(分别为16.6%和19.6%，分别为10.685%)。　　

　　相反，与单纯RT组(10.705%vs10.685%)相比，单纯RT组并没有显著增加帕博西尼组的凋亡细胞比例。对于CNE-2，与对照组相比，单纯rt处理组凋亡细胞比例显著增加(12.635%比9.375%)，而单纯帕博西尼处理组凋亡细胞比例无显著变化(11.42%比9.375%)。与单纯RT组相比，RT组帕博西尼明显促进细胞凋亡(21.655%vs12.635%)。　　

　　为了探讨帕博西尼增加细胞凋亡的机制，我们接下来评估了细胞暴露于放疗和化疗时作为凋亡介导因子的线粒体ROS水平。我们的数据显示，在CNE-1和CNE-2中，放疗明显增加了线粒体ROS水平，而帕博西尼均失败。此外，与单纯rt治疗相比，应用掌切术治疗的CNE-1和CNE-2明显升高。　　

　　结果表明，帕博西尼诱导细胞凋亡的部分原因是ROS水平的升高。　　

　　CNE-1和CNE-2细胞的生长抑制对掌痛和辐射的反应　　

　　为评价掌ciclib对细胞活力的抑制作用，将不同浓度的掌ciclib分别加入CNE-1和CNE-2细胞72h，用CCK8法测定细胞增殖能力。帕博西尼显著降低了CNE-1和CNE-2细胞的细胞活力，IC50值分别为2.05和0.86。接下来，我们通过集落形成实验研究了用帕博西尼+RT处理的CNE-1和CNE-2细胞的生长效应和辐射敏感性。　　

　　结合方案更加有说服力地克制幸存的数量单独CNE-1CNE-2细胞比RT-only组。D0，Dq，N，SF2也普遍低于所有组合方案，RT-only组(表1)，代表高灵敏度RT辐照细胞。此外，在放疗组后，在掌侧切术中观察到SF值的最大降低。相反，放疗组术前的掌痛下降最小，同时掌痛和放疗组是中度的。N增加后的帕博西尼辐射组相比RT-only和其他综合治疗组显示细胞的修复能力升高(表1)。因此，暴露的细胞之前帕博西尼辐射证明至少SER(分别为CNE-1=1.05，CNE-2=1.02)，而帕博西尼辐射后显示，最喜欢的爵士(CNE-1=1.475，CNE-2=1.20)。　

　　帕博西尼抑制辐射诱导的CNE-1和CNE-2细胞的DNA修复　　

　　阐述帕博西尼的影响在DNA双链断裂(双边带)修复CNE-1CNE-2细胞接受辐射，荧光免疫细胞化学的磷酸化γ-H2AX53bp1(双边带标记)的DNA损伤进行演示和量化CNE-1和CNE-2细胞系准备帕博西尼和辐射。我们的数据显示，6Gy照射显著提高了小鼠的细胞免疫化学阳性率(小鼠的细胞免疫化学阳性率分别为:c-1:22.94和c-2:c-2:c-2:c-2:c-2；CNE-1:25.48，CNE-2:20.26为53BP1)在辐射后一小时。在放射24小时后，3-H2AX和53BP1病灶出现明显下降(3-H2AX分别为3-46和2-3.94；53BP1的CNE-1:4.58和CNE-2:3.28)。　　

　　与单独暴露于辐射24小时的细胞相比，帕博西尼（哌柏西利）加辐射显著提高了细胞的60min-H2AX和53BP1水平。同时RT组及RT组CNE-1、CNE-2细胞均高于RT组。(ct-h2ax和53BP1病灶/核平均值:CNE-1:PA->RT=6.08，RT+PA=12.62，ct-h2axRT->PA=10.82；53BP1的RT->RT=7.96，RT+PA=15.12，RT->PA=11.02；CNE2:PA->RT=6.6，RT+PA=12.52，RT->PA=9.22，PA->RT=8.46，RT+PA=15.54，RT-PA=12.48。帕博西尼可以在老挝买到吗？详情请扫码咨询：