INC280卡马替尼对非小细胞肺癌和具有MET癌症类作用

　　在我们的细胞筛选中，发现MET扩增的肺癌细胞系EBC-1对MET抑制异常敏感。通过测量各种临床相关的MET抑制剂系列对该细胞系增殖的影响，可以证实这一点。每种MET抑制剂虽然具有不同的效力，但都引起了对增殖的深远抑制。然后，我们证实了体内EBC-1细胞系的卡马替尼敏感性。INC280卡马替尼对非小细胞肺癌和具有MET癌症类作用，值得注意的是，即使是大型的EBC-1异种移植肿瘤也经过治疗后明显消退。为了进一步描述卡马替尼在体内肺癌中的活性，我们首先分析了诺华公司的患者异种移植模型（PDX）集合，但未发现任何MET扩增或外显子14跳跃突变的肺癌模型。

　　因此，我们转向带有66个肺癌PDX模型的外部注释良好的PDX集合，其中包含基因表达数据，基因拷贝数，以及整个外显子组测序数据。通过Affymetrix阵列和RNA-seq对METmRNA表达的测量非常吻合，我们选择了MET表达最高的三种肺腺癌模型进行进一步研究。在其中两个模型中也观察到较高的总蛋白和磷酸-MET蛋白水平。

　　有趣的是，MET基因的拷贝数更加不同，在两个模型中都有高水平的扩增，并且拷贝数仅适度，非常宽泛在第三个模型中。这个星座使我们能够研究在不存在扩增的情况下高MET表达是否足以预测对卡马替尼的反应。确实，所有三种模型均因卡帕替尼的MET抑制而经历了深刻的回归，包括两种模型的小鼠亚组中的完全应答。据体重监测确定，治疗耐受性良好。然而，在停止治疗的第21天，所有肿瘤都重新生长，表明疾病持续存在。

　　在研究结束时，通过使用多点ELISA定量肿瘤溶解物中的总MET和磷酸MET，来测量卡帕替尼的药效学作用。 LXFA623肿瘤的总和磷酸MET水平明显低于MET扩增模型。在最后一次给药后2小时可以明显检测到MET抑制，在给药后12小时在三个模型中的两个模型中有一定程度的磷酸MET恢复。在第三个PDX模型集合中，鉴定了具有MET外显子14跳跃突变和中等MET拷贝数增益的肺癌模型LU5381，从而使MET外显子14跳跃与高水平MET扩增分离。用卡马替尼治疗携带LU5381异种移植物的小鼠时，我们观察到肿瘤消退。

　　值得注意的是，卡马替尼还具有抗肝癌异种移植模型的作用，该模型中MET基因被扩增。在体外筛选中，推定的自分泌细胞系通常对卡马替尼治疗表现出相对微妙的反应。然而，如胶质母细胞瘤细胞系U87-MG所证明的那样，源自此类模型的异种移植物的体内反应更为显着。因此，实验条件可能会对此类临床前模型的表观敏感性产生重大影响。先前已经报道了响应MET抑制剂而发生的其他MET/HGF自分泌胶质母细胞瘤异种移植的退化。当我们处理胃癌细胞系IM95的异种移植物时，它比H87-MG表达更高的HGF mRNA水平，并产生与细胞培养上清液中检测到的HGF相当的量，没有明显的生长减少。

　　这个结果证实了表达HGF的癌症模型可以在体内显示出对卡马替尼的明显反应，但是HGF表达的水平似乎不足以对反应深度进行定量预测。我们分析了两种MET扩增的肺癌细胞的反应更详细地将细胞系EBC-1和NCI-H1993应用于卡马替尼，旨在区分生长停滞与细胞死亡。为此，我们使用特定的荧光染料通过自动显微镜对总细胞和死细胞进行了定量。有趣的是，在卡帕替尼治疗后，EBC-1细胞显示出明显更高的细胞死亡率，尽管未达到100％，而在NCI-H1993中的作用在很大程度上限于抑制增殖。该观察表明，MET抑制后的生长和生存力降低并不总是严格相关的。