再使用索拉非尼/多吉美后对酪氨酸激酶抑制作用

　　为了确定索拉非尼（多吉美）是否诱导MT表达，将Huh7（人类HCC细胞系）细胞用索拉非尼处理了6和24小时，并检测了MT-1A，-1B，-1E，-1F，-1G，-1H，通过Q-PCR分析-1M，-1X和2A。在这些MT中，MT-1G是索拉非尼治疗后诱导的最高基因。相反，在用其他酪氨酸激酶抑制剂治疗后，Huh7细胞中MT-1G的mRNA表达未受到影响。

　　一致地，蛋白质印迹分析显示，在用索拉非尼而非其他酪氨酸激酶抑制剂治疗后，Huh7细胞中MT-1G的蛋白水平显着升高，但MT-1A的蛋白水平却未显着升高。此外，在其他人类HCC细胞系和HCC患者的原发肿瘤肝细胞中观察到索拉非尼诱导的MT-1G蛋白表达。这些数据表明索拉非尼可特异性诱导多种人类HCC细胞表达MT-1G。以前的研究表明索拉非尼可调节不同转录因子的活性。影响HCC细胞的细胞死亡和存活。为了确定索拉非尼诱导的MT-1G表达所需的转录因子，将针对p53，HIF1α和NRF2的靶标特异性shRNA转染到Huh7和/或HepG2中。细胞。索拉非尼对p53，HIF1α和NRF2的mRNA水平没有显着影响。

　　有趣的是，敲低NRF2而不是p53和HIF1α可以显着抑制索拉非尼诱导的MT-1G mRNA表达。作为阳性对照，敲除p53抑制了HepG2细胞中顺铂诱导的p21 mRNA表达，而敲除HIF1α抑制了Huh7细胞中缺氧诱导的GLUT1 mRNA表达。与我们先前的研究一致（20），索拉非尼主要在蛋白质水平而非mRNA水平增加NRF2表达。敲除NRF2还抑制了索拉非尼诱导的Huh7和HepG2细胞中MT-1G蛋白的表达。此外，有效的NRF2抑制剂限制了Huh7细胞中索拉非尼诱导的NRF2转录活性和MT-1G表达。 PPG是胱硫醚酶的不可逆抑制剂，在以前的报道中被用来抑制MT的合成。

　　PPG还抑制Huh7细胞中索拉非尼诱导的NRF2转录活性和MT-1G表达。因此，这些发现表明索拉非尼诱导HCC细胞中MT-1G的表达需要通过胱硫醚酶途径激活NRF2。为了确定MT-1G表达的增加是否调节索拉非尼的抗癌活性，两种针对MT-1G的不同shRNA转染到Huh7和HepG2细胞中。确实，RNAi抑制MT-1G表达显着增强了索拉非尼诱导的48小时细胞死亡，如细胞生存力测定所示。集落形成试验还表明，在索拉非尼治疗后，MT-1G表达的抑制抑制了长期HCC细胞的增殖。 NRF2抑制剂和PPG均可提高索拉非尼诱导的HCC细胞死亡。这些发现共同表明，抑制MT-1G表达可增强索拉非尼在HCC细胞中的抗肿瘤敏感性。为了确定MT-1G介导索拉非尼耐药的基础，我们用几种有效的细胞死亡抑制剂处理了MT-1G敲低的HCC细胞。在索拉非尼治疗后，铁质抑制因子。 ZVAD-FMK（一种凋亡抑制剂）和坏死磺酰胺（一种坏死病抑制剂）对索拉非尼诱导的细胞死亡没有影响。

　　相反，ZVAD-FMK抑制星形孢菌素诱导的细胞凋亡刺激，而坏死磺酰胺抑制坏死性刺激（TNFα+ ZVAD-FMK）诱导的细胞死亡。此外，MT-1G的敲低还增强了经典的促铁促性激素珠蛋白的诱导的细胞死亡。该过程可以被ferrostatin-1和liprostatin-1（而不是ZVAD-FMK和坏死磺酰胺）逆转。这些发现表明，MT-1G是HCC细胞中肥大症的负调节剂。Ferroptosis的特点是脂质过氧化产物的积累，需要大量丰富的可利用的细胞铁。因此，我们进一步研究了MT-1G是否参与脂质过氧化和铁代谢的调节，从而导致索拉非尼耐药。在MT-1G敲低细胞中，用蛋白素和索拉非尼治疗后，脂质过氧化的终产物显着增加。现在索拉非尼价格是多少，在哪里购买？更多详情可咨询下方微信。