索拉非尼/索拉菲尼和UDCA抑制肝癌细胞存活　

　　索拉非尼和UDCA抑制肝癌细胞存活　　

　　在Huh-BAT和HepG2细胞中评价索拉非尼和UDCA联合治疗的细胞毒性。肝癌细胞治疗清廉μM索拉非尼，0-1000μMUDCA孤独，或5μM索拉非尼+750μMUDCA48h。索拉非尼治疗或UDCA减少Huh-BAT的可行性和HepG2细胞浓度的方式，而co-treatment都表现出显著更大的细胞毒性与索拉非尼。　

　

　　索拉非尼和UDCA诱导HCC细胞caspase依赖性凋亡　　

　　接下来，本研究评估了联合治疗是否影响Huh-BAT和HepG2细胞的凋亡。对处理后细胞的显微镜图像分析显示，索拉非尼、UDCA及其共同处理显著改变了细胞形态。用药物处理的细胞的AnnexinV/PI染色证实了这一结果。未处理的对照Huh-BAT组细胞凋亡比例为3%，UDCA和索拉非尼处理后分别增加到15%和9%。索拉非尼和UDCA联合治疗后，凋亡细胞的%增加到18%。对于HepG2细胞，未处理对照组的凋亡细胞比例为6%，在UDCA或索拉非尼处理后增加到9%。两种药物联合治疗后，细胞凋亡显著增加至26%。这些结果表明，索拉非尼可诱导细胞凋亡，而当索拉非尼和UDCA共同作用于Huh-BAT和HepG2细胞时，这种作用增强。　　

　　通过westernblotting检测caspase-3和caspase-9的表达，探讨凋亡作用的机制。结果显示，与单独孵育索拉非尼的细胞相比，在Huh-BAT和HepG2细胞中，索拉非尼和UDCA共孵育的细胞中，蛋白及其裂解形式的表达水平显著升高。这些结果表明，联合治疗可通过caspase依赖性凋亡诱导Huh-BAT和HepG2细胞死亡。　　

　　索拉非尼和UDCA以时间和浓度依赖的方式抑制STAT3的激活　　

　　接下来，我们研究索拉非尼和UDCA共同作用对STAT3磷酸化的影响。单独用索拉非尼或UDCA处理Huh-BAT和HepG2细胞时，Try705上STAT3的磷酸化水平均降低，且均呈时间和浓度依赖性。与未处理的细胞相比，索拉非尼和UDCA共同处理后，两种细胞系中磷酸化的STAT3水平下降。免疫荧光分析采用IL-6作为阳性对照，IL-6是一种诱导Tyr705上STAT3磷酸化的炎症因子。结果表明，UDCA和索拉非尼抑制了STAT3的磷酸化。这些发现表明，在Huh-BAT和HepG2细胞中，这些药物的共同作用调节了Try705上STAT3的磷酸化。　　

　　索拉非尼和UDCA以时间和浓度依赖的方式触发ROS生成和ERK激活　　

　　细胞内ROS是影响癌细胞因DNA损伤而发生凋亡的重要因素。因此，测量细胞间ROS的产生。共聚焦显微镜检测到，索拉非尼和UDCA共同作用诱导Huh-BAT和HepG2细胞内ROS生成。与单独使用培养基孵育的细胞相比，单独使用索拉非尼和UDCA的细胞内ROS生成增加。与单独孵育索拉非尼的细胞相比，平均荧光强度似乎有所增加，尽管这种差异并不显著。　　

　　接下来，我们检测了Huh-BAT和HepG2细胞中ERK的磷酸化情况。Westernblot分析显示，在单独使用索拉非尼或UDCA处理的细胞中，ERK均以时间和浓度依赖的方式磷酸化。与未处理的细胞相比，索拉非尼和UDCA共同处理后，两种细胞系磷酸化ERK水平均升高。与单独索拉非尼相比，HepG2细胞中phospho-ERK水平在共处理后显著升高，但在Huh-Bat细胞中未观察到这种效应。这些观察结果表明，索拉非尼和UDCA联合诱导的细胞凋亡与ROS的产生有关，并由hh-bat和HepG2细胞ERK的磷酸化介导。　　

　　在索拉非尼和UDCA共同作用的Huh-BAT细胞中，ROS的产生和ERK的激活与STAT3磷酸化的下调相关　

　　为了研究ROS生成、ERK激活和STAT3去磷酸化之间的关系，我们用ROS清除剂NAC或ERK抑制剂U0126处理Huh-BAT细胞，在有无索拉非尼、UDCA或两者同时存在的情况下。首先，用NAC预处理细胞以评估ROS的作用。NAC预处理有效地抑制了Huh-BAT细胞中索拉非尼和udca诱导的ROS生成。接下来，我们研究了索拉非尼和UDCA治疗后ERK和ROS在STAT3失活中的作用。U0126或NAC预处理的Huh-BAT细胞与索拉非尼和UDCA共处理后，细胞中phospho-STAT3水平显著升高，ERK水平下降。这些结果表明，ROS和ERK可能在索拉非尼（索拉菲尼）和UDCA处理后抑制STAT3的过程中发挥重要作用。索拉非尼怎么买呢？详情请扫码咨询：