靶向药卡马替尼在哪里购买

　　卡马替尼是现在全世界首款口服式的MET患者用药，对于治疗转移性非小细胞肺癌（NSCLC）的成年患者有着不错的控制效果。今年已经通过了美国药监局的批准已经成功上市，暂定的售价都在十几万人民币一盒，非常的昂贵，靶向药卡马替尼在哪里购买？尽管如此，现在也是有价无市，国内有没有售卖，所以更多的人希望能买到药物，也希望买到便宜的版本，现在各大国家药厂其实都在仿制卡马替尼，现在老挝已经有消息快要投入生产了，如果您有需要可以添加下方微信，我们会在第一时间向您提供售卖。其他仿制药，我们也均有售卖。

　　EBC-1细胞系是携带MET扩增的NSCLC细胞系，购自JCRB细胞库（日本大阪）。通过逐步暴露于终浓度分别为1.5、2.2和2.4μmol/ L的卡马替尼来建立耐卡马替尼的EBC-1细胞系（EBC-CR1，-CR2和-CR3），并且从没有这种细胞的情况下不从其中选择一个克隆。将EBC-CR1，-CR2和-CR3细胞维持在1μmol/ L卡马替尼中2个月以上，并通过多种耐药机制进行选择；这些被称为卡帕替尼耐药细胞系。将所有细胞系在37°C培养箱中，在含10％FBS，2 mmol / L L-谷氨酰胺（Gibco）和1％青霉素/链霉素（Gibco）的RPMI1640培养基中孵育。

　　卡帕替尼（MET抑制剂），克唑替尼（间变性淋巴瘤激酶/ MET抑制剂），阿法替尼（不可逆EGFR抑制剂），BYL719（PI3Kα抑制剂），PD1730-74（成纤维细胞生长因子受体[FGFR]抑制剂）和BGJ398（FGFR抑制剂）分别为从塞勒克化学公司（马萨诸塞州波士顿）购买。卡马替尼的制备浓度为5 mmol / L，其他药物制备为10 mmol / L的100％二甲基亚砜储备溶液。重组肝素结合型EGF样生长因子（HBEGF）购自Prospec（新泽西州东布伦瑞克市）。使用PowerPlex试剂盒通过短串联重复STR分析对本研究中使用的所有细胞系进行身份验证。为确定细胞系对这些抑制剂的体外敏感性，将细胞以5,000的密度接种到96孔微孔板中细胞/孔并在暴露于药物之前在培养基中孵育24小时。将细胞与抑制剂的连续稀释液以200μL/孔的终体积孵育72小时。温育72小时后，将Ez-cytox（Dogen，韩国首尔）添加到每个孔中，并将板在37℃温育器中温育3小时。

　　使用Eon Microplate分光光度计在450nm的测试波长下测量光密度。 IC50值通过Sigma Plot 12计算。将细胞以5×105 /孔的密度接种在6孔板中，用于细胞周期和凋亡分析。 24小时后，将细胞用抑制剂处理72小时。收集贴壁细胞和浮细胞，并用碘化丙锭（1.0 mg / mL）和RNase A（10mg/mL）染色。 EBC-1通过BD 和ModFit LT verity软件通过流式细胞仪分析对细胞周期分布和sub-G1群体进行定量。

　　将在6孔板中生长至足够密度的亲本和EBC-CR1，-CR2和-CR3细胞系分别单独用卡马替尼处理2小时，用卡马替尼和阿法替尼组合处理24小时，或用BYL719处理24小时。兔单克隆抗体，用于检测磷酸-MET（Tyr-1234 / 1235），磷酸-EGFR（Tyr1068），磷酸-STAT3（Tyr705），磷酸-AKT（Ser473），总MET，总EGFR，总AKT，总p44 / 42 MAPK，3-磷酸甘油醛脱氢酶和用于检测总STAT3的小鼠单克隆抗体购自。

　　将蛋白G / A琼脂糖树脂与兔单克隆抗MET抗体，抗EGFR抗体或兔IgG对照孵育2小时，作为阴性对照，将1 mg蛋白质的细胞裂解液与抗体偶联树脂在4°C混合过夜。使用Pierce Co-IP试剂盒（Thermo Fisher Scientific）进行共免疫沉淀。洗涤，洗脱并通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离免疫沉淀。如上所述进行蛋白质印迹。通过定量聚合酶链反应（PCR）确定基因拷贝数。使用Exgene Cell SV Kit从细胞系中提取基因组DNA。使用定量PCR确定基因拷贝数如下：使用GeneAmp PCR系统，用特异性引物和扩增gDNA。