克唑替尼/赛可瑞和吉非替尼联合治疗效果

　　出乎意料的是，我们在除一个预处理样本外的所有样本中都检测到了EGFR激活。这些病例均未发现激活的EGFR突变。的确，与最近的一项研究报道50例未经克唑替尼（赛可瑞）的患者中有3例同时存在ALK重排和EGFR突变的研究相反，我们发现103例ALK阳性患者和214例EGFR突变阳性患者之间没有重叠病例。因此，在未曾出现克唑替尼，ALK阳性的NSCLC的情况下，EGFR激活不太可能是EGFR突变的结果。

　　鉴于我们在未治疗的癌症标本中观察到了很大比例的EGFR磷酸化，因此我们希望确定EGFR活化在对克唑替尼敏感的疾病中是否在功能上很重要，并且可能减轻对克唑替尼的初始反应。在H3122细胞中，添加EGFR抑制剂不会增加克唑替尼的效力。但是，我们研究了另一种细胞系MGH006，该细胞系来自我们先前报道的未曾患有克唑替尼的晚期ALK阳性NSCLC的患者。在细胞存活试验中，MGH006细胞对克唑替尼敏感，但不如H3122细胞敏感。与抗性H3122 CR3细胞相似，MGH006细胞表达高水平的磷酸化和总EGFR蛋白。

　　与单独的克唑替尼相比，克唑替尼和吉非替尼联合治疗MGH006细胞可显着抑制下游AKT和ERK磷酸化。特别地，ERK信号传导途径的抑制需要在该细胞系中同时抑制ALK和EGFR。 ALK和EGFR的联合抑制作用还可以更有效地抑制生长，并显着诱导凋亡（。总之，这些结果表明，即使对于未曾使用克唑替尼的患者，EGFR活性也可能有助于维持下游信号传导，从而降低了单药克唑替尼的疗效。

　　在18个耐克唑替尼的标本中，有6个具有足够的组织，可以使用称为Snapshot的高度敏感的多重基因分型平台筛选14个与癌症相关的基因中的突变。在其他12个样品中，我们的研究用尽了核酸以鉴定ALK抗性突变。尽管在这六个案例中未观察到突变，但一个样本MGH0NZ在Snapshot和标准Sanger测序中对KIT突变呈阴性，但在原始Snapshot描迹上的序列峰值异常高。为了确定较高的KIT峰是否可能反映基因扩增，我们在抗性样品以及相应的克唑替尼前样品上进行了KIT FISH。在组织学水平上，耐药样品包括具有两种不同成分的肺腺癌：支气管肺泡癌（BAC）成分和实体生长成分。

　　如图4B所示，固体成分而非BAC成分或克唑替尼前样品未显示出通过FISH显着扩增的KIT基因（每个细胞超过五个拷贝）。与FISH结果一致，我们在抗性样品的固体成分中检测到KIT蛋白水平升高，但未检测到预处理样品或抗性样品的BAC成分。我们还观察到固体成分内基质细胞中KIT配体，干细胞因子的表达增加，但抗药性样品的预处理样品或BAC成分却没有。尽管BAC成分未显示出KIT扩增或表达的证据，但与克唑替尼前样品相比，我们在肿瘤的这一部分检测到了磷酸化EGFR的增加。基于Ki67染色，KIT扩增的固体成分的增殖指数高于BAC或预处理样品的增殖指数。

　　这些发现表明，同一患者可能会激活多个旁路通道，从而导致克唑替尼耐药。此外，我们确定了一个病例既有局灶性KIT扩增又有继发性ALK突变，支持每位患者内部TKI耐药的多种机制的观点。对克唑替尼具有抗性，我们设计了克唑替尼敏感性H3122细胞，以通过慢病毒感染过表达野生型KIT。在没有外源添加SCF的情况下，过表达KIT的H3122细胞对克唑替尼仍然高度敏感。但是，在存在SCF的情况下，过表达KIT的H3122细胞对克唑替尼具有高度抗性，并维持下游ERK和AKT信号传导。以及ABL和PDGFR进行治疗，可以完全逆转耐药性表型。现在克唑替尼的作用也是非常不错，更多详情可咨询下方微信。