依鲁替尼/亿珂调节LPS诱导的胞质水平

　　转录因子信号转导子和转录激活子3是在LPS治疗后调节促炎细胞因子水平的关键信号分子。我们检查了依鲁替尼是否调节LPS诱导的p-STAT3（Ser727）水平。 BV2小胶质细胞用依鲁替尼（亿珂）或媒介物（1％DMSO）处理5 h，然后用LPS（1μg/ ml）或PBS处理45分钟，并用抗p-STAT3进行蛋白质印迹和抗STAT3抗体。

　　我们发现依鲁替尼降低了BV2小胶质细胞中LPS诱导的p-STAT3水平。然后，我们测试了依鲁替尼是否单独改变BV2小胶质细胞中的p-STAT3水平。将BV2小胶质细胞用依鲁替尼或媒介物处理6小时，并用抗p-STAT3和抗STAT3抗体进行蛋白质印迹。有趣的是，与不使用LPS的载体治疗相比，依鲁替尼本身下调了p-STAT3（Ser727）水平。

　　接下来，我们检查了依鲁替尼是否调节LPS诱导的胞质和核p-STAT3水平。 BV2小胶质细胞用依鲁替尼（1μM）或溶媒预处理30分钟，然后用LPS或PBS处理5.5 h，然后进行亚细胞分级分离。与媒介物处理相比，LPS处理显着增加了细胞核（图6d，e）和胞质溶胶中的p-STAT3）水平。此外，依鲁替尼显着降低了LPS刺激的核p-STAT3（Ser727）水平的升高，并有降低胞质p-STAT3水平的趋势。为了验证这些发现，我们用抗p-STAT3和抗CD11b抗体进行了免疫细胞化学，发现依鲁替尼显着下调了BV2小胶质细胞中LPS诱导的核p-STAT3（Ser727）的水平 。这些数据表明，依鲁替尼可调节细胞质和细胞核中的p-STAT3水平，从而修饰LPS诱导的促炎反应。

　　为了研究依鲁替尼是否通过调节AKT信号来改变LPS诱导的核内p-STAT3水平，将BV2小胶质细胞用MK2206（AKT抑制剂，10μM）或溶媒（1％DMSO）预处理30分钟，然后通过使用依鲁替尼（1μM）或溶媒处理30分钟，然后用LPS（1μg/ ml）或PBS处理5小时。用抗CD11b和抗p-STAT3抗体进行免疫细胞化学。与上述发现一致，与LPS治疗相比，依鲁替尼显着降低LPS诱导的核p-STAT3（Ser727）水平。与LPS治疗相比，用MK2206和LPS治疗可显着降低LPS诱导的核p-STAT3（Ser727）水平。

　　此外，与MK2206和LPS治疗相比，MK2206，依鲁替尼和LPS治疗显着抑制LPS诱导的核p-STAT3水平。这些数据表明，依鲁替尼可能以独立于AKT的方式影响LPS诱导的核p-STAT3水平。小胶质细胞运动与促炎反应有关。因此，我们检查了依鲁替尼是否调节LPS诱导的BV2小胶质细胞迁移。我们通过用依鲁替尼（500 nM）或溶媒对细胞预处理1 h，然后对LPS或PBS预处理23 h，进行了伤口愈合试验。与媒介物处理相比，LPS处理显着增加了BV2小胶质细胞迁移。

　　此外，与LPS治疗相比，依鲁替尼显着降低LPS刺激的BV2小胶质细胞迁移。然后，我们调查了依鲁替尼本身是否调节BV2小胶质细胞迁移。使用细的移液器吸头刮擦BV2小胶质细胞，并立即成像（0小时）。然后将细胞用依鲁替尼或溶媒处理24小时，然后对伤口间隙进行成像。我们发现，与不使用LPS的媒介物治疗相比，单独使用依鲁替尼不能降低BV2小胶质细胞迁移。这些数据表明，依鲁替尼可调节LPS诱导的BV2小胶质细胞迁移。然后我们进一步研究了依鲁替尼是否通过AKT信号转导LPS诱导的BV2小胶质细胞迁移。

　　使用细的移液器吸头刮擦BV2小胶质细胞并立即成像，然后用MK2206或媒介物，依鲁替尼（500 nM）或媒介物（30％）处理30分钟，最后加入LPS（100 ng / ml）或PBS 23小时。与我们上述发现一致，与LPS治疗相比，依鲁替尼显着抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞迁移。更重要的是，与用MK2206和LPS或依鲁替尼治疗相比，用MK2206，依鲁替尼和LPS治疗并没有改变LPS诱导的BV2小胶质细胞迁移。现在依鲁替尼的效果也是非常不错，如果您有需要购买，更多详情可咨询下方微信。