依鲁替尼/亿珂对神经炎症的作用

　　为了测试依鲁替尼（亿珂）对神经炎症的作用，我们首先检查了依鲁替尼对BV2小胶质细胞是否有毒性。将BV2小胶质细胞用媒介物（1％DMSO）或依鲁替尼处理24小时，然后进行MTT分析。较低剂量的依鲁替尼不显示毒性。我们还检查了较高剂量的依鲁替尼对细胞生存力的影响。为此，将BV2小胶质细胞用溶媒或依鲁替尼处理24小时，然后进行MTT分析。我们发现，在浓度高达25μM的情况下，依鲁替尼不会诱导BV2小胶质细胞毒性。要确定依鲁替尼是否会改变LPS诱导的BV2小胶质细胞形态，可将细胞用依鲁替尼（1μM）或溶媒30分钟，然后用LPS或PBS处理5.5 h。然后将细胞固定在4％多聚甲醛中，并用抗CD11b抗体进行免疫染色。与载体处理的细胞相比，LPS处理的BV2小胶质细胞显示出从细胞体延伸的细长过程。

　　依鲁替尼预处理再经LPS处理减少了从细胞体延伸的细长过程的数量，这些细胞的形态类似于媒介物处理过的细胞。研究依鲁替尼的潜在调节作用在促炎反应上，将BV2小胶质细胞用媒介物（1％DMSO）或依鲁替尼（1μM）处理30分钟，然后用LPS（1μg/ ml）或PBS处理5.5 h。分离总RNA，并使用RT-PCR测量促炎细胞因子水平。与不使用LPS的媒介物治疗相比，单独使用依鲁替尼不会改变任何促炎细胞因子水平。但是，依鲁替尼显着降低LPS诱导的促炎细胞因子水平。

　　作为替代方法，我们进行了免疫细胞化学。对于此实验，将BV2小胶质细胞用溶媒或依鲁替尼处理30分钟，然后用LPS（1μg/ ml）或PBS处理5.5 h。然后，用抗CD11b和抗COX-2抗体进行免疫染色。依鲁替尼显着降低BV2小胶质细胞中LPS诱导的COX-2水平。为了进一步证实这些发现，我们进行了IL-1βELISA分析。

　　为了对此进行测试，将BV2小胶质细胞用依鲁替尼（500 nM）或溶媒预处理30分钟，用LPS或PBS处理24 h，然后进行IL-1βELISA分析。与上述发现一致，与LPS治疗相比，依鲁替尼显着降低了LPS诱导的IL-1β水平。这些结果表明，用依鲁替尼预处理可以调节LPS介导的BV2小胶质细胞中促炎反应的增加，然后研究用依鲁替尼进行后处理是否会改变LPS刺激的促炎反应。用LPS（1μg/ ml）或PBS处理BV2小胶质细胞30分钟，然后用溶媒（1％DMSO）或依鲁替尼（1μM）处理5.5 h。

　　然后，分离总RNA，并通过RT-PCR测量促炎细胞因子水平。同样，与不使用LPS的媒介物治疗相比，使用依鲁替尼本身的治疗并没有降低任何促炎细胞因子的水平。但是，用依鲁替尼治疗后可显着降低LPS诱导的COX-2，IL-6和iNOS的mRNA水平，但不能降低其他促炎细胞因子的mRNA水平。因此，这些数据表明，依鲁替尼的预处理（作为预防措施）或后处理（作为治疗方法）差异调节BV2小胶质细胞中LPS刺激的促炎反应。细胞，原代小胶质细胞先用溶媒（1％DMSO）或依鲁替尼（1μM）处理30分钟，然后用LPS（1μg/ ml）或PBS处理5.5 h。

　　然后通过RT-PCR测量促炎细胞因子水平。 LPS治疗显着上调了促炎细胞因子的水平。相比之下，依鲁替尼显着下调了原发性小胶质细胞中LPS介导的促炎细胞因子COX-2和IL-6的mRNA表达水平的上调。然后，我们检查了依鲁替尼是否也影响LPS刺激的原发星形胶质细胞中促炎细胞因子水平。用载体（1％DMSO）或依鲁替尼（1μM）处理原代星形胶质细胞30分钟，然后用LPS（或PBS处理5.5 h，然后通过RT-PCR测量促炎细胞因子水平。出乎意料的是，依鲁替尼没有降低LPS诱导的原代星形胶质细胞中任何促炎细胞因子的水平。这些数据表明依鲁替尼根据细胞类型选择性影响促炎反应。