奥希替尼9291是否会诱导CRC细胞凋亡

　　奥希替尼降低CRC细胞的增殖，诱导细胞凋亡　　

　　为了确定奥希替尼对CRC细胞的影响，我们将HCT15和SW48细胞用增加浓度的奥希替尼处理72h，采用MTS法分析其增殖情况。根据结果，奥希替尼有效地降低了这些细胞系的细胞增殖。接下来，我们研究了奥希替尼是否会诱导CRC细胞凋亡。在凋亡检测中，我们发现10个剂量g/mL奥希替尼增加了HCT15细胞中Annexinv阳性细胞的数量。我们的研究结果还显示，奥希替尼诱导HCT15细胞中caspases3和7的激活。凋亡反应在pan-caspase抑制剂z-VAD-fmk预处理后也被发现减弱，提示凋亡反应是caspase依赖性的。此外，奥希替尼处理增加了HCT15细胞中caspase3和9的活化。以上数据表明，奥希替尼抑制CRC细胞增殖，诱导细胞凋亡。

　　奥希替尼诱导不依赖p53的PUMA诱导　　

　　接下来，我们研究了奥希替尼诱导CRC细胞凋亡的机制。奥希替尼10mol/mL处理HCT15细胞，检测诱导。奥希替尼处理HCT15细胞后，蛋白和mRNA水平显著上调，且呈时间依赖性。奥希替尼也能诱导p53-Knockdown(p53-KD)HCT15细胞中PUMAmRNA的表达。提示奥希替尼是通过不依赖p53的方式诱导的表达。此外，奥希替尼也能诱导SW48细胞中的表达。然而，奥希替尼治疗并未上调Bax、Bid和Bim等其他促凋亡Bcl-2家族成员，但降低了抗凋亡蛋白mcl1的表达。这些结果表明，奥希替尼选择性诱导PUMA，而不考虑p53的状态，并可能介导其抗癌作用。　　

　　PUMA介导奥希替尼诱导的细胞凋亡

　　接下来，我们研究了是否需要PUMA用于奥希替尼诱导的细胞凋亡。奥希替尼诱导的凋亡在PUMAstableknockdown(PUMA-kd)HCT15细胞中显著降低。AnnexinV/PI染色证实了奥希替尼诱导的PUMA-KDHCT15细胞凋亡的减少。此外，我们的研究结果显示，奥希替尼诱导的caspases3/7活化在PUMA-KDHCT15细胞中被阻断。缺乏也阻断了奥希替尼诱导的线粒体事件，包括caspases3和9的激活和细胞色素C的释放。我们的结果表明，PUMA对于奥希替尼在CRC细胞中的抗癌作用是必要的。　　

　　奥希替尼诱导的PUMAexpression需要p73　　

　　接下来，我们分析了奥希替尼(9291)诱导CRC细胞中PUMA表达的机制。为了进一步阐明诱导机制，我们对几种介导诱导的转录因子进行了研究。由于在奥希替尼处理后磷酸化/激活未发生变化，FoxO3a不参与其中。由于缺乏诱导，也排除了E2F1和p65。我们发现，在HCT15细胞中，奥希替尼以时间和剂量依赖的方式诱导p73上调。在HCT15细胞中，siRNA敲除p73后，奥希替尼的诱导失效。为了确定p73是否能直接激活，我们发现在奥希替尼通过ChIP处理后，p73被招募到包含p73结合位点的基因组区域。这些结果表明，在奥希替尼的作用下，p73直接与启动子区结合，驱动其转录激活。　　

　　在奥希替尼治疗后，PI3K/AKT信号通路对p73的诱导是必要的　　

　　PI3K/AKT通路促进细胞存活，是EGFR信号通路的下游效应因子。接下来，我们研究了奥希替尼对与PUMA和p73相关的PI3K/AKT信号的影响。我们发现奥希替尼治疗强烈抑制了AKT的磷酸化(Ser473)。奥希替尼处理后，外源性激活AKT抑制的PUMA和p73的表达。这些结果表明，PI3K/AKT通路介导了奥希替尼通过p73介导的PUMA的表达。　　

　　PUMA介导奥莫替尼的化学增敏作用　

　　在临床研究中，奥希替尼已与其他化疗药物联合使用。我们推测，由于奥希替尼(9291)和其他药物同时通过不同途径诱导，诱导可能介导了奥希替尼的化疗增敏作用。因此，联合治疗导致HCT15细胞凋亡水平升高，caspase3活化。然而，联合诱导的凋亡和caspase3活化在PUMA-kdHCT15细胞中被消除。这些结果表明，PUMA介导了奥希替尼的化学敏化作用。奥希替尼的仿制药可以在孟加拉碧康和老挝东盟买到，怎么购买呢？详情请扫码咨询: