帕博西尼/哌柏西利对肥大细胞脱颗粒有抑制作用

　　背景：　　

　　肥大细胞的激活导致脱颗粒和细胞因子的释放，从而促进炎症。本研究的目的是研究CDK4/6抑制对体内外肥大细胞活化的抑制作用。　　

　　方法：　　

　　RBL-2H3大鼠嗜碱性白血病细胞(BLCs)和小鼠骨髓源性肥大细胞(BMMCs)用抗二硝基酚(DNP)免疫球蛋白(Ig)E抗体致敏，用DNP-人血清白蛋白(HSA)抗原刺激，用CDK4/6抑制剂帕博西尼处理。应用组织学染色显示细胞形态变化。采用小鼠ige介导的被动皮肤过敏反应(PCA)和卵清蛋白(OVA)诱导的主动全身过敏反应(ASA)模型，研究帕博西尼对体内过敏反应的影响。Westernblots检测肥大细胞激活相关的细胞信号分子的表达。　　

　　结果：　　

　　激活的BLCs和BMMCs释放大量颗粒相关介质(组胺和β-己糖胺酶)，帕博西尼以浓度依赖性的方式减少这些介质。帕博西尼抑制肥大细胞活化标记CD63的表达，抑制颗粒释放(甲苯胺蓝染色可见)，同时阻止形态改变(保持拉长的形状)和丝状肌动蛋白(F-actin)重组。帕博西尼可剂量依赖性地抑制与BLCs刺激肥大细胞激活相关的分子Lyn和/或丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号，并减轻PCA小鼠的过敏反应。帕博西尼可降低卵清蛋白卵控ASA小鼠体温降低和血清组胺水平。　　

　　结论：　　

　　帕博西尼在体内外均可抑制ige介导的肥大细胞激活，提示其可能通过抑制肥大细胞脱颗粒作用而发展为肥大细胞介导的过敏性疾病的治疗药物。　　

　　在本研究中，帕博西尼通过DNP-IgE/hasc刺激BLCs和bmmc减少组胺和β-己糖胺酶的释放，证明帕博西尼对肥大细胞脱颗粒有抑制作用。在我们的体内实验中，帕博西尼剂量依赖性地减弱了DNP-IgE/hsa诱导的PCA反应(Evans蓝外渗)，并抑制ASA反应(即OVA挑战诱导的体温降低和血清IL-4或IL-10水平升高)。这些结果表明，CDK4/6抑制剂帕博西尼在体内外均能抑制ige介导的肥大细胞激活。　　

　　肥大细胞脱粒过程中，由于收缩微丝的作用，发生形态学变化。通过IgE-FcεRI复合物聚集的肥大细胞激活引起促炎介质的脱颗粒和释放，这些过程涉及F-actin重组。我们的研究结果表明，帕博西尼预处理抑制BLCs细胞形状改变和细胞骨架分解，类似于先前报道的黄豆碱抑制肥大细胞脱颗粒。　　

　　蛋白酪氨酸激酶的激活是肥大细胞上FcεRI交联最早可检测到的信号反应。酪氨酸激酶激活后，涉及Src家族激酶Lyn和/或通过MAPKs的细胞内信号传导的分子机制促进肥大细胞脱粒。肥大细胞激活抑制剂，包括皮质类固醇激素地塞米松，已被证明通过下调信号通路抑制肥大细胞激活。同样，我们观察到帕博西尼抑制了Lyn的激活和MAPK通路信号。　　

　　药物再利用，即将以前开发的药物疗法用于新的应用，可以加快临床药物发现和开发。药物转用的主要优点是先前建立的低细胞毒性和药代动力学活性。例如，在体外和体内实验中，二甲双胍被证实可抑制IgE和芳香烃受体介导的肥大细胞活化，二甲双胍是一种被广泛使用的具有抗癌作用的抗糖尿病药物。此外，止泻的药小檗碱，广泛用于胃肠道疾病，如细菌性肠胃炎和痢疾，已经发现抑制肥大细胞介导过敏反应通过下调FcɛRI激活和MAPK信号。因此，在现有药物中寻找可用于靶向肥大细胞活化的新型过敏性疾病治疗的药物是一个很有前途的策略。　　

　　目前，帕博西尼正被用作抗癌药物。它通过抑制CDK4/6来抑制癌细胞的生长。2017年，它被美国FDA批准作为绝经后女性ER+/HER2-晚期乳腺癌的辅助治疗，与内分泌阻滞剂联合。汇总安全性分析(PALOMA试验)显示，在治疗的前6个月，不良事件的发生率达到高峰，随后随着时间的推移，发生率下降。在临床应用中，口服帕博西尼在其肿瘤剂量(125mg/d，21天on，7天offschedule)下一般耐受良好。当剂量为150mg/kg时，帕博西尼对小鼠的体重没有影响。帕博西尼的低毒性和在我们的小鼠模型中抑制肥大细胞活化的能力表明帕博西尼可用于缓解ige介导的人类过敏性疾病。　　

　　帕博西尼通过细胞周期阻滞的方式抑制细胞生长，提示肥大细胞的激活可能需要不受阻的细胞周期进程。上调CDK6表达可增强MAPK和NF-κB信号，这两者都与肥大细胞活化有关。之前的研究表明帕博西尼可以抑制肿瘤肥大细胞增殖并没有表明帕博西尼是否也抑制肥大细胞活化，特别是细胞降解，这是过敏性疾病治疗的关键靶点。　　

　　因此，鉴于帕博西尼CDK抑制性行为和抑制信号分子表达的能力和/或激活，我们假设帕博西尼管理low-cytotoxicity剂量可能施加anti-IgE-mediated过敏影响MAPK的显示和/或NF-κB信号下游CDK6抑制通过FcεRI的激活可能是调制的Src家族激酶Lyn。Lyn与FcεRIβ相互作用，在FcεRI介导的人肥大细胞激活中是不可或缺的，而特异性抑制Lyn信号可能是治疗人类变态反应性疾病的一种新的治疗策略。我们的结果表明帕博西尼抑制肥大细胞的激活可能涉及到抑制Lyn和/或MAPK信号。　　

　　有趣的是，帕博西尼（哌柏西利）降低ASA模型血清IL-10总水平。IL-10由多种细胞类型分泌，甚至包括肥大细胞。IL-10增强ige介导的肥大细胞反应，是体内过敏发展的必要介质。此外，在小鼠过敏模型中，IL-10已被证明对Th2反应至关重要。本实验结果提示，帕博西尼抑制肥大细胞可以降低IL-10甚至Th2细胞的水平。这些可能性需要通过进一步的实验直接加以检验。　　

　　总之，我们的研究结果显示，CDK4/6抑制剂帕博西尼在体内和体外均可抑制ige介导的肥大细胞激活，提示帕博西尼是一种潜在的肥大细胞介导的变应性疾病的治疗候选药物，包括过敏性鼻炎、特应性皮炎和过敏反应。抑制肥大细胞活化是ige诱导的过敏反应的重要致病过程，是缓解过敏症状和治疗过敏反应的新策略。很多人都会购买老挝版本的帕博西尼，它好在哪？详情请扫码咨询：