他拉唑帕尼/他唑帕尼在细胞中的DNA修复酶要比维利帕尼更有效

　　接下来，我们比较了两种具有相同酶抑制作用但具有不同PARP捕获能力的浓度的PARP抑制剂。维利帕尼是有效的PARP酶活性抑制剂。然而，相比于他拉唑帕尼（他唑帕尼），一种有效的酶抑制剂具有优良捕集PARP临床研究PARP抑制剂。在NCI-H446细胞中，我们发现200 nM 他拉唑帕尼产生的酶促抑制作用水平与1600 nM 维利帕尼。这个比率与先前在无细胞抑制试验中报道的结果一致。

　　正如预期的那样，该他拉唑帕尼的浓度与维拉帕利尽管维利帕尼抑制了其酶促活性，但在1600 nM时没有放射增敏作用，而相反，200 nM 他拉唑帕尼足以诱导有效的放射增敏作用。我们通过比较20 nM 他拉唑帕尼和最多800 nM 维利帕尼的浓度在第二个细胞系NCI-H82中验证了这一发现。与我们基于这些药物的无细胞IC50的预测相反，将H82放射增敏至与他拉唑帕尼相同的程度（VDM为1.26对DMF为1.33）时，需要增加40倍浓度的维利巴利。塔拉唑帕尼比酶等效浓度的维利普利布具有更大的放射增敏作用。

　　NCI-H446中肿瘤PAR的Western印迹显示全细胞裂解物中PAR聚合的抑制水平相似。模拟照射和6 Gy照射后，抑制水平保持相似。用200 nM 他拉唑帕尼或1.6 uM 维利帕尼处理后，在无辐射的情况下进行了3次重复实验，其平均PAR和SD定量值在统计浓度之间没有统计学差异。在100kDa和200kDa的条带之间量化以DMSO对照的百分比表示的泳道强度，并标准化为肌动蛋白加载对照。

　　200 nM的他拉唑帕尼在NCI-H446细胞中引起的PARP捕获要比1.6 uM的维利帕利更大。进行与0.01％甲基甲烷硫酸盐（MMS）的共处理，以通过诱导DNA损伤来检测PARP捕获。NCI-H446的克隆存活试验表明，在200 nM 他拉唑帕尼处有明显的放射增敏作用，而在1.6 uM的维利帕尼处则没有。NCI-H82的克隆存活试验表明，NCI-H82在20 nM 他拉唑帕尼时具有显着的放射增敏作用，但在浓度高达800 nM的维利巴利时则没有。误差棒代表标准偏差。

　　在酶抑制的等价水平上，他拉唑帕尼诱导的DNA双链断裂（DSB）比维利帕尼更高。接下来，我们试图确定PARP抑制剂和PARP捕获的放射增敏作用是否是由于诱导的细胞毒性DNA DSB数量增加所致。我们使用磷酸化的γ-H2AX（gH2AX）亚核灶间接定量了DNA DSB在各种治疗条件下。当量化单独暴露于PARP抑制剂48小时的影响时，他唑帕尼产生的DNA DSB（每核平均58.7 gH2AX病灶）明显多于维利帕尼（19.3）和DMSO（8.4）对照。

　　当与药物治疗24小时内的放射线结合使用时，也观察到了这些差异（他拉唑帕尼75.6，维利帕利布32.8，DMSO 22.4）。为了消除持续产生DSB的持续药物暴露的影响，我们进行了一项实验，其中在照射后1小时将药物冲洗掉并更换培养基，以便在gH2AX病灶定量之前约24小时恢复细胞。我们发现与IR相比，他拉唑帕尼产生的残留DNA DSB比维利帕尼和DMSO和没有IR（40.0、19.6、14.6）。这表明存在持久的细胞毒性DSBs在被困PARP的存在下可以增强放射治疗的数量。现在他拉唑帕尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。