帕博西尼/哌柏西利可以激发强大的抗肿瘤活性

　　背景：　　

　　放射治疗是鼻咽癌的主要治疗手段。虽然早期病灶放疗可获得较高的生存率，但远处转移和局部复发也经常发生。在本研究中，我们对细胞周期蛋白依赖性激酶4/6抑制剂(帕博西尼)联合放射治疗鼻咽癌细胞的抗肿瘤活性及其机制进行了初步研究。　　

　　方法：　　

　　帕博西尼放疗增强的评价基于CCK8和细胞增殖克隆原性检测、流式细胞术检测细胞凋亡、ROS水平和细胞周期以及免疫细胞化学检测DNA双链断裂修复的结果。　　

　　结果：　　

　　帕博西尼通过降低RB磷酸化和阻滞细胞周期来抑制精通RB的CNE-1和CNE-2的细胞生长。通过抑制细胞生长、诱导细胞凋亡，掌痛联合放疗明显优于掌痛联合放疗。同时加放疗和放疗后加放疗的抗肿瘤活性均优于放疗后加放疗的抗肿瘤活性。同时，两种较好的联合方案均具有较高的G2/M期细胞比例，明显抑制DNA双链断裂修复，最终引发肿瘤细胞凋亡。　

　

　　结论：　　

　　我们的研究表明，帕博西尼可以激发强大的抗肿瘤活性，作为一个潜在的辅助治疗鼻咽癌的RB表达。　　

　　鼻咽癌(鼻咽癌)起源于鼻咽上皮，具有独特的地理分布模式。鼻咽癌主要发生在亚洲东部和东南部，以及非洲北部和东部。1局部鼻咽癌放疗5年控制率可达80%-90%，但仍有部分个体发展为远处转移和局部复发，这主要是由于放疗耐药。2因此，寻找新的药物或治疗方式，提高鼻咽癌的放射敏感性，改善预后至关重要。　

　　帕博西尼是一种针对周期蛋白依赖性激酶4和6(CDK4/6)的强有力的口服高特异性抑制剂，可实现细胞周期G1期和S期之间的过渡，诱导成视网膜细胞瘤(RB)肿瘤抑制蛋白失活和G1期细胞周期阻滞。3帕博西尼是第一个被FDA批准作为晚期乳腺癌一线治疗的CDK4/6抑制剂。值得注意的是，在一些临床试验中，帕博西尼被证明在处理rb熟练的细胞瘤、脂肪肉瘤、黑色素瘤方面很有前途。此外，临床前证据显示，联合或单独治疗对结直肠癌、非小细胞肺癌、胰腺癌和卵巢癌有效。5.帕博西尼在胶质母细胞瘤、非典型畸胎横纹样肿瘤和非小细胞肺癌中也能促进放射敏感性。6,7然而，帕博西尼在鼻咽癌放疗联合应用时是否可作为一种有利的抗肿瘤药物，尚不清楚。　

　　在本研究中，我们在体外验证了帕博西尼增强了CNE-1和CNE-2细胞的辐射敏感性的假设。为了确定最佳的给药顺序，我们分析了各种帕博西尼加放疗的方案。结果表明，棕榈注射液通过延缓DNA双链断裂修复和诱导细胞周期阻滞，增强放疗的抗肿瘤活性，从而促进细胞凋亡。此外，本研究还表明，同时行掌侧切加放疗和放疗后行掌侧切能较好地提高放疗敏感性。　　

　　p16-cyclinD1-CDK(4/6)-Rb通路在介导细胞周期G1/S转变中具有重要意义。当RB磷酸化时，周期蛋白依赖性激酶Cdk4和Cdk2复合物会释放E2F并允许s相相关蛋白的表达。8根据全外显子组测序(韦斯)的研究中,许多实体肿瘤包括人大拥有CCND1放大和过度而CDKN2A失活,9会增加CDK4/6的活动和功能丧失的Cdk抑制剂p16、p27、p53,最终促进RB蛋白的磷酸化和激活。10到目前为止，有文献证明小鼠模型和临床转移性鼻咽癌NPC-pdxs(patient-derivedxenograft,NPC-pdxs)有CCND1扩增和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂CDKN2A缺失，11这意味着我们针对鼻咽癌细胞中活化的CDK4/6的研究是可行的。　　

　　RB蛋白表达阳性是帕博西尼发挥抗肿瘤活性的必要条件。在我们的研究中也发现，精通rb的CNE-1和CNE-2对帕博西尼更敏感。之前的体外研究表明，在胶质细胞瘤中，缺乏p16表达和CDK4未扩增的细胞对帕博西尼更敏感。11在我们的研究中，较低浓度的帕博西尼抑制了p16缺陷CNE-2细胞株的增殖，相比p16熟练CNE-1。因此，我们推测p16可能是鼻咽癌患者掌侧切瘤反应的潜在决定因素。然而，我们的研究显示掌侧切血反应与CDK4、CDK6等其他因子的表达无关，它们是否参与掌侧切血反应尚不清楚。　　

　　细胞周期的改变是影响辐射敏感性的一个重要因素。帕博西尼是一种口服生物利用、可逆转的CDK4/6抑制剂。据报道，它通过阻断RB磷酸化将细胞周期阻滞在g1期，最终抑制细胞增殖。12在我们的研究中，CNE-1和CNE-2细胞在仅用帕博西尼和帕博西尼照射后，细胞周期阻滞在g1期。我们认为，G1/S检查点在大部分癌细胞中存在缺陷，G2/M检查点阻滞往往是决定癌细胞辐射敏感性的关键因素。13我们的数据显示，与照射组和照射组相比，照射组和照射组的G2/M期细胞的比例明显增加，这可能部分解释了照射组和照射组的抗肿瘤效果较好。　　

　　研究表明，辐射可诱导DNA损伤，直接或在肿瘤细胞S期DNA复制后引发相关反应，包括细胞周期阻滞和细胞死亡(凋亡或衰老)。14然而，当细胞周期停止时，几个DNA修复途径会被激活，以治愈DNA断裂，最终导致辐射敏感性降低。为了增强固有的肿瘤辐射敏感性，合理的组合CDK抑制剂有助于细胞对电离辐射(IR)的应激反应。15我们的研究显示,帕博西尼显著延长期间未修理的DNA断裂引起的红外三个方案帕博西尼和RT,此外,抑制IR-induced双链断裂修复并发帕博西尼帕博西尼更喜欢和RT组以及后帕博西尼RT组比帕博西尼RT组紧随其后。　　

　　细胞凋亡是肿瘤细胞暴露于辐射下的主要死亡类型。细胞凋亡率与细胞类型和辐射剂量有关。我们认为，在CDK4/6抑制剂作用下，rb熟练细胞表现出凋亡反应，而CDK4/6抑制剂对rb缺乏的肿瘤细胞的凋亡影响不大。据报道，暴露于辐射会提高ROS水平，并产生神经酰胺，最终诱导细胞凋亡。17在本研究中，相对于单纯RT,帕博西尼增加了受过RB表达的CNE-1和CNE-2细胞的凋亡率。此外，逆转录治疗后给予掌侧切细胞比逆转录治疗后给予掌侧切细胞产生更多凋亡细胞。我们的数据归因于帕博西尼促进辐照细胞凋亡的ROS升级。在我们的研究中，与单纯放疗相比，放疗后联合应用掌切术可显著提高ROS水平。因此，棕榈叶可能是鼻咽癌放疗中一种很有前途的辅助药物，它可以通过介导细胞凋亡来提高放疗敏感性。　　

　　传统的鼻咽癌治疗方法主要是放疗和化疗，但鼻咽癌的远处转移和局部复发仍然是一个棘手的问题　　

　　临床前研究表明CDK4/6抑制剂可增强NSCLC20和胶质母细胞瘤的放射敏感性。与这些发现相一致的是，我们首先通过设计不同的治疗方法来研究CDK4/6抑制剂帕博西尼（哌柏西利）是否对受照射的鼻咽癌细胞有益。最终，我们的研究表明，联合应用帕博西尼和RT，特别是先应用RT再应用帕博西尼和同时应用帕博西尼和RT，可以提高鼻咽癌细胞的抗肿瘤活性。详情请扫码咨询：