奥希替尼/泰瑞沙抑制GBM细胞增殖

　　采用细胞计数kit-8(CCK8)实验评价第三代EGFR抑制剂奥希替尼（泰瑞沙）对6个GBM细胞系生长的影响。我们的研究结果表明，奥希替尼（泰瑞沙）显著抑制六GBM细胞系的生长表现出剂量依赖性抑制作用，IC50值从1.25到3.0μΜ。　　

　　与先前的报道一致，我们的研究表明，第一代的IC50表皮生长因子受体抑制剂高于10μΜ，和奥希替尼（泰瑞沙）在GBM细胞生长的抑制活性是10倍高于第一代的表皮生长因子受体抑制剂。这些结果提示奥希替尼（泰瑞沙）可能是治疗GBM的EGFR靶向药物，可能比第一代EGFR抑制剂有更好的治疗效果。　　

　　为了进一步研究奥希替尼（泰瑞沙）是否会因脱靶效应而抑制GBM细胞生长，我们构建了两株稳定表达野生型EGFR和Cys797突变型EGFR的U87细胞系。EGFR催化区域的Cys797残留对奥希替尼（泰瑞沙）的抑制作用至关重要。我们的数据显示，奥希替尼（泰瑞沙）处理显著抑制了表达野生型EGFR的细胞的生长。而在表达Cys797突变型EGFR的细胞中，奥希替尼（泰瑞沙）对胶质瘤细胞生长的抑制作用几乎消失。　　

　　为验证奥希替尼（泰瑞沙）对GBM细胞增殖的抑制作用，用奥希替尼（泰瑞沙）处理U87和U251GBM细胞。然后用EdU测定细胞增殖。1e-h，1e-h，奥希替尼（泰瑞沙）处理组的U87和U251GBM细胞计数明显低于对照组。EdU-positiveU87细胞的百分比和U251GBM细胞系后2μΜ奥希替尼（泰瑞沙）治疗减少了37.37%和25.59。提示奥希替尼（泰瑞沙）对GBM细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性。　　

　　为了观察奥希替尼（泰瑞沙）对GBM细胞周期的长期抑制作用，我们采用菌落形成实验来评价奥希替尼（泰瑞沙）对U87和U251GBM细胞系形成菌落能力的影响。奥希替尼（泰瑞沙）显著抑制了这些GBM细胞系的集落形成。与对照组相比，殖民地形成于U87细胞的数量在2μΜ奥希替尼（泰瑞沙）治疗显著降低，67.82%。　　

　　在U251细胞中也观察到类似的结果。随后，我们使用甲基纤维素菌落测定法来测定有无奥希替尼（泰瑞沙）预处理的GBM细胞株培养菌落的能力。我们发现奥希替尼（泰瑞沙）处理显著降低了U87和U251细胞的菌落数量和大小。　　

　　综上所述，奥希替尼（泰瑞沙）显著抑制了GBM细胞形成集落的能力。为了探讨奥希替尼（泰瑞沙）抑制GBM细胞增殖的机制，本研究采用流式细胞术分析其细胞周期分布。　　

　　奥希替尼（泰瑞沙）处理后，U87和U251GBM细胞系细胞周期进展均阻滞在G1期。与未处理细胞相比，奥希替尼（泰瑞沙）处理后G1期细胞数量显著增加，S期和G2期细胞数量相应减少。这些结果表明奥希替尼（泰瑞沙）诱导的GBM细胞增殖减少是由于细胞周期阻滞在G1期。详情请扫码咨询：